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生物化学实验报告（共2篇）

篇一：生物化学实验报告

2012年生物化学实验b

姓名：学号：实验时间：实验分组：组内成员：任课教师：实验

报告

xxxx2012年11月17日

摘要

1.实验部分

1.1试剂与仪器

1.试剂：

（2）1mol/l醋酸，1mol/lnaoh，硫酸铵。（3）平衡缓冲液：

0.01mol/ltris-hcl，ph8.0。

（5）酶的底物溶液：用底物缓冲液配制15×10-3mol/l对硝基

苯磷酸二钠溶液。

（7）分离胶缓冲液：1.5mol/ltris-hcl缓冲液，ph8.8，已加入

10%sds。（8）浓缩胶缓冲液：0.5mol/ltris-hcl缓冲液，ph6.8，

已加入10%sds。

（13）脱色液：500ml10%甲醇和10%冰醋酸的脱色液1000ml。

匀浆机、eppebdorf5型冷冻离心机、gsy—2型恒温水浴、

uv762型紫外可见分光光度计。

1.2小牛肠碱性磷酸酶提取方法

2）将小肠粘膜液集中倒入匀浆机中，加冰冷蒸馏水，高速匀浆，

重复多次。3）缓慢加入冰冷正丁醇高速匀浆重复多次。在4℃，

10000rpm条件下离心。4）用滤布过滤去除杂质，倒入分液漏斗中，

静止分层，取下层水相，用hac溶液调ph到4.9。

5）得到上清后放入离心管中，用naoh溶液调ph至6.5，称取硫

酸铵加到离心管中溶解；再加冰冷丙酮，混匀，4℃静置30min以上。

6）上清液中加入冰冷丙酮，4℃放置30min以上。4℃，10000

rpm，离心。7）取沉淀溶于平衡缓冲液至全部溶解至冰箱保存待用。

1.3小牛肠碱性磷酸酶酶活检测方法

2）紫外分光光度计检测条件为405nm波长，测定时间60s，取

值2s，记录范围0.0-1.5。

上下倒2次，放回分光光度计中，测定酶动力学曲线

1.4聚丙烯凝胶制备

分离胶制备（浓度10%，制备量10ml）

试剂用量h2o

30%丙烯酰胺

1.5mol/ltris-hcl缓冲液ph8.8

10%过硫酸铵

temed

4.1ml3.4ml2.4ml100μl10μl

浓缩胶制备（浓度5%，制备量6ml）试剂h2o

30%丙烯酰胺

0.5mol/ltris-hcl缓冲液ph6.8

10%过硫酸铵

temed

用量3.4ml1.0ml1.5ml60μl8μl

1.5考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

3）各取100μl加入到5ml考马斯亮蓝试管中，混匀，反应5

min以上。

5）取2个比色皿，加入考马斯亮蓝，分光光度计中校对归零。6）

将样品放入外侧比色皿中，读吸光值。

1.6sds-聚丙烯凝胶电泳测定蛋白质相对分子量

5）观察测定蛋白的迁移率及条带，对照标准样品，分析蛋白样品

的分子量及纯度。

2.结果与讨论

2.1小牛肠碱性磷酸酶酶活检测

根据酶动力计算公式：

a/min?vr?d

比活力（u/mg）＝

e405?ve?c?l

根据上图，?a/min=3.5/mi