分子生物学复制公开课.pptx

基因信息传递;生命简史;;;TheLifeStory40亿年;TheLifeStory40亿年;科学家复原“杜马伊”形象;学科简史;1865年Mendel’sPea

1941年OneGene,OneEnzyme

1953年DNAdoublehelix

1966年GeneticCodeCracked

1972年FirstrecombinantDNA

1982年Firsttransgenicmice

人类基因组测序基本完毕;分子生物学发展阶段;分子生物学发展阶段;;;;;第十章DNA生物合成

BiosynthesisofDNA;复制DNA

遗传信息亲代——>子代；

转录和翻译——基因表示

基本三类RNA

制造蛋白质，决定生物表现型

;中心法则补充;DNAdependentDNApolymerase——DDDP

DNAdependentRNApolymerase——DDRP

RNAdependentRNApolymerase——RDRP

RNAdependentDNApolymerase——RDDP;第一节复制基本规律

——复制特点;DNA复制机制三种假说;;1958年M.Messelson和F.Stahl

15N培养基→14N培养基

提取DNA，作密度梯度离心;;阐明半保留复制意义;二、复制起始点origin

DNA复制从特定位点起始（复制子）

富含AT

原核生物一个

真核生物多个;三、双向复制

bidirectionalreplication;;;四、需要引物primer

DNAPolymerase

不能从头开始

只能延伸已有核酸链

引物酶Primase

合成一小段RNA链(引物)

提供3’端自由羟基（3’-OH）

引物大小

原核生物:50～100个核苷酸

真核生物：约为10个核苷酸

;;五、半不连续复制

DNA聚合酶

合成方向5‘——>3’

DNA双链逆向平行

DNA解链和复制同时进行;5′端;5‘——>3’;;;领头链(leadingstrand)

连续

随从链(laggingstrand)

不连续

冈崎片断(Okazakifragment)

原核生物1K～2K

真核生物100;;;第二节酶学和拓扑学改变

DNA复制条件;底物substrate模板template;解链及拓扑学改变;解螺旋酶（unwindingenzyme）

解链酶或rep蛋白

解开DNA双链

2ATP/bpbasepair

;;引起体和RNA引物;单链DNA结合蛋白;;拓扑异构酶(topoisomerase);解链过程中正超螺旋形成;;;;;DNA聚合酶(DDDP);polⅢ由十种亚基构成

全酶关键部分（关键酶）

α、ε和θ三种亚基构成

α亚基5’→3’聚合活性

ε亚基3’→5’外切活性

确保DNA复制准确性/保真性

polⅢ无5’→3’外切活性;外切酶活性方向;;?亚基与模板结合;?亚基形成一个围绕DNA环状钳;polⅠ单一肽链

可被一些蛋白酶水解为两个片段

大片段称为Klenowfragment

惯用工具酶;323个氨基酸;原核生物中三种DNA聚合酶?;真核生物五种

polα、polβ、polγ、polδ、polε

polα含有引物酶活性

polδ主力

Polγ参与线粒体DNA复制

Polε损伤修复、校读和填补缺口

polβ低保真参与应急修复;三、复制保真性酶学依据;（一）DNA-pol核酸外切酶活性和及时校读;（二）复制保真性和碱基选择;碱基配对

碱基选择

及时校读;DNA连接酶;DNA连接酶催化条件是：

3‘-OH，5’-P

未封闭缺口位于双链DNA中（局部）

消耗能量

原核生物中由NAD+供能

真核生物中由ATP供能。

;HO;DNA连接酶在复制中起接合缺口作用

在DNA修复、重组及剪接中起同样作用

基因工程主要工具酶;小结;一、复制起始

预引起：

DnaA+DnaB+DnaC+SSB

解旋解链，形成复制叉：

组装引起体：

引起

引物酶合成引物 DnaG

拓扑酶解旋;oriC结构特性;;;;;;二、复制延长;（二）引起体移动：

引起体向前移动，解开新局部双螺旋，形成新复制叉，随从链重新合成RNA引物，继续进行链延长。;;;;三、复制终止;;（二）连接冈崎片段：

在DNA连接酶催化下，形成最后一个磷酸酯键，将冈崎片