(2)--2 DNA的复制分子生物学及常用技术.ppt

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DNA的复制

生物所以有遗传现象,是与遗传物质DNA的复制有关系的。

一、DNA复制的一般特征1、半保留复制模式2、半不连续复制3、需要RNA引物4、双向复制

1、DNA半保留复制

三种不同的复制假设模型(引自S.Simmons2003)

2.半不连续复制Semi-discontinuousreplicationLeadingstrandLaggingstrandReplicationfork前导链的连续复制和滞后链的不连续复制在生物界是有普遍性的,因而称之为DNA的半不连续复制。

Semi-discontinuousreplication半不连续复制:Okazakifragment冈崎片段[3H]Thymidinepulse-chaselabelingandalkalnesucrosegradient:discoveryofsemi-discontinousreplication,温度敏感菌株DNAligasenascent

Inbacteriatheyareapproximately1000ntinlength;ineukaryotestheyareapproximately200ntinlength.

DNA的合成就是在3’羟基不断的加上核苷三磷酸。3、DNA聚合酶特点——需要引物

ArthurKornbergDiscoveredanenzymeinE.colithatcouldcatalysethesynthesisofDNA?HecalleditDNAPolymerase?NowknownasDNApolymeraseI1959-NobelprizeinPhysiologyorMedicine

RNApriming:DNAsynthesisisprimedbyRNAthatisthenremovedbeforefragmentsarejoined.DNApolymerase(DNA聚合酶)cannotinitiateDNAsynthesisdenovo(从头开始)

Replicon(复制子):基因组上DNA能独立进行复制的一段完整单位;包括复制起点(origin)和复制终点(terminus)。4、双向复制

Bidirectionalreplication(双向复制)ofacircularbacterialrepliconDNA在复制叉处两条链解开,各自形成互补链,在电子显微镜下可以看到形如眼的结构,环状DNA复制眼形成希腊字母?型。

ReplicationoftheE.colichromosomeIn1963,JohnCairns

MultipleeukaryoticrepliconsReplicationfork真核生物染色体的DNA是线性双链分子,含有许多复制起点,因此是多复制子。

在以这种机制进行的复制中,亲代双链DNA的一条链在DNA复制起点处被切开,其5'端游离出来。这样,DNA聚合酶Ⅲ便可以将脱氧核糖核苷酸聚合在3'-OH端。当复制向前进行时,亲代DNA上被切断的5'端继续游离下来,并且很快被单链结合蛋白所结合。因为5'端从环上向下解链的同时伴有环状双链DNA环绕其轴不断的旋转,而且以3'-OH端为引物的DNA生长链则不断地以另一条环状DNA链为模板向前延伸,因而称为滚环复制。

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