T∕CACM 1027.104-2018 铁皮石斛PCR鉴定.docx

ICS11.120.10

C23

团体标

准

T/CACM1027.104—2018

铁皮石斛PCR鉴定

PCRidentificationofDendrobiiOfficinalisCaulis

2018-11-19发布

2018-11-19实施

中华中医药学会发布

T/CACM1027.104—2018

I

目次

前言 III

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4方案 2

5仪器设备 2

5.1离心机 2

5.2金属浴 2

5.3制冰机 2

5.4涡旋振荡器 2

5.5超纯水发生器（分子生物学级别） 2

5.6高压灭菌锅 2

5.7PCR仪 2

5.8电泳仪及其附件 2

5.9凝胶成像仪 2

5.10核酸蛋白仪 2

5.11电子天平（感量0.01g） 3

5.12连续可调微量移液枪 3

5.13低温冰箱 3

5.14其他 3

6试剂和溶液配制 3

6.1概述 3

6.2三羟甲基氨基甲烷-盐酸（Tris-HCl）溶液 3

6.30.5mol/L乙二胺四乙酸（EDTA）溶液 3

6.4前处理缓冲液 3

6.5CTAB提取缓冲液 3

6.6脱氧核糖核苷三磷酸dNTP混合液 3

6.710×PCR缓冲液 3

6.8不含3’→5’外切酶活性的Taq酶（5U/μL） 4

6.9铁皮石斛检测用引物对序列 4

6.10引物溶液 4

6.11琼脂糖（电泳纯） 4

6.12DNA分子量标准 4

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II

6.1350×TAE电泳缓冲液 4

6.146×上样缓冲液 4

7检验程序 4

7.1概述 4

7.2取样 4

7.3粉碎 5

7.4DNA提取 5

7.5PCR扩增 5

7.6扩增产物检测 6

8结果判定 6

8.1荧光染料显色检测 6

8.2琼脂糖凝胶电泳检测 6

9结果报告 6

9.1一般要求 6

9.2鉴定报告 6

10质量保证 7

11废弃物处理 7

附录A（规范性附录）多糖、多淀粉类中药及种子种苗DNA提取方法 8

附录B（资料性附录）铁皮石斛鉴定PCR反应体系的建立 10

参考文献 18

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III

前言

本标准按照GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》规定的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由中华中医药学会提出并归口。

本标准起草单位：中国中医科学院中药资源中心、浙江省食品药品检验研究院。

本标准主要起草人：袁媛、黄璐琦、马临科、蒋超、李文庭、赵玉洋、祝明、赵维良、周骏辉、何雅莉。

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1

铁皮石斛PCR鉴定

1范围

本标准规定了使用PCR鉴定铁皮石斛药材和饮片、种子种苗的通用方法和要求。本标准适用于铁皮石斛药材和饮片、种子种苗的鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

《中华人民共和国药典》（四部）

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

送检样品testsample

按一定规则取自某一整体，能反映该整体的相关信息，可以作为判断该整体情况的一个或多个部分。

3.2

DNA提取DNAextraction

从测试样本中分离出DNA的方法。

3.3

聚合酶链式反应polymerasechainreaction；PCR

一种用于扩增特定DNA片段的分子生物学技术，即DNA片段的特异性体外扩增过程，其特异性依赖于与目的DNA片段两端互补的寡核苷酸引物。

3.4

阳性对照positivecontrol

一般使用对照样品代替送检样品同法DNA提取、靶核酸扩增和产物检测过程。

注：用于证明鉴定过程可获