流式细胞仪结果分析.ppt

第四节在免疫学检验中的应用流式细胞术目前已广泛地被应用于免疫学基础研究和逐步进入临床应用各方面，用流式细胞仪对细胞表面的抗原成分进行标记分析，可区别多种细胞的特性，为细胞免疫的研究增加了有效的手段和帮助。第64页,共71页，2024年2月25日，星期天T淋巴细胞及其亚群分析 Th(CD3+CD4+CD8-T);Tc(CD3+CD4-CD8+T)B淋巴细胞及其亚群分析 B1(CD19+CD5+):产生IgM型自身抗体,参与免疫调节、与自身免疫病的发生有关 B2(CD19+CD5-):受外来抗原刺激,产生高亲和性特异性抗体NK细胞分析 NK(CD3-CD16+CD56+)一、淋巴细胞及其亚群的分析第65页,共71页，2024年2月25日，星期天二、淋巴细胞功能分析细胞介导细胞毒性试验(死细胞与活细胞比例)细胞内细胞因子测定三、淋巴造血系统及白血病免疫分型对淋巴瘤和白血病进行多色免疫分型用于选择化疗方案、判断预后及检出微小残留病变第66页,共71页，2024年2月25日，星期天CD4+Th细胞、CD4+/CD8+比例 MDR(+)表示对化疗药物耐药四、肿瘤耐药基因分析五、AIDS病检测中的应用第67页,共71页，2024年2月25日，星期天HLA-B27可出现在58%～97%的强直性脊椎炎(As)患者 六、自身免疫病相关HLA抗原分析第68页,共71页，2024年2月25日，星期天七、移植免疫中的应用FCM作为一个强大的技术平台，已应用于多个领域，其在移植免疫分析中的应用也越来越广泛。目前移植免疫中的FCM应用主要包括流式细胞术的交叉配型（Flowcytometrycross-matching,FCXM）和群体反应性抗体（Panelreactiveantibody,PRA）检测。第69页,共71页，2024年2月25日，星期天思考题流式细胞仪的分析检测原理是什么？流式细胞仪分析中前向散射光、侧向散射光和荧光的检测意义。何谓荧光补偿？何谓“液相芯片”技术？细胞分选的基本原理。FCM分析中有哪些数据显示方式，如何解读结果及其设门分析的意义？如何进行FCM分析检测样品的制备？流式细胞分析前如何验证仪器工作状态，采用何种校正物？流式细胞免疫分析的质量控制包括哪些方面？流式细胞术有哪些临床应用价值？流式细胞仪分析中常见的荧光素有那些？他们的特性如何？第70页,共71页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第71页,共71页，2024年2月25日，星期天由一维参数(散射光或荧光)与颗粒计数(COUNT)构成，反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。（一）单参数直方图第32页,共71页，2024年2月25日，星期天单参数直方图细胞相对数量信道(channel)第33页,共71页，2024年2月25日，星期天双参数直方图：纵轴和横轴分别代表被测量细胞的两个测量参数，根据这两个参数就可以确定细胞在图上的表达位置。双参数信号通常采用对数信号，最常用的是点密图，在图中，每个点代表一个细胞，点图利用颗粒密度反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。（二）双参数直方图第34页,共71页，2024年2月25日，星期天1.双参数直方图点图绿色荧光强度红色荧光强度第35页,共71页，2024年2月25日，星期天双参数直方图点图第36页,共71页，2024年2月25日，星期天2.二维等高图由类似地图上的等高线组成，其本质也是双参数直方图。等高图上每一条连续曲线上具有相同的细胞相对或绝对数，即“等高”。曲线层次越高(越里面的线)所代表的细胞数愈多。等高线越密集则表示细胞数变化率越大。第37页,共71页，2024年2月25日，星期天二维等高图第38页,共71页，2024年2月25日，星期天3.假三维等高图第39页,共71页，2024年2月25日，星期天（三）三参数直方图第40页,共71页，2024年2月25日，星期天多参数分析：当细胞标记了多色荧光，被激发光激发后，得到的荧光信号和散射光信号可根据需要进行组合分析。（四）流式细胞仪的多参数分析第41页,共71页，2024年2月25日，星期天Gate设置：指在某一张选定参数的直方图上，根据该图的细胞群分布选定其中想要分析的特定细胞群，并要求该样本所有其他参数组合的直方图只体现这群细胞的分布情况。根据门的形状又分为了线性门、矩形门、圆形门、多边形门、任意形状门和十字门。三、设门分析技术第42页,共71页，2024年2月25日，星期天A淋巴细胞B单核细胞C中性粒细胞A、B、C均为