进出口蜂王浆中大环内酯类抗生素残留量的检测方法 液相色谱串联质谱法.docx

SN/T2062—2008

进出口蜂王浆中大环内酯类抗生素残留

量的检测方法液相色谱串联质谱法

1范围

本标准规定了蜂王浆中螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、泰乐菌素、红霉素、罗红毒素、交沙毒素残留

量的制样和液相色谱串联质谱测定方法。

本标准适用于蜂王浆中螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、秦乐菌素、红霉素、罗红霉素、交沙霉素残留量的检测。

2方法提要

样品用甲醇沉淀蛋白质，在磷酸盐缓冲盐溶液介质下，再用C,固相萃取小柱净化，液相色谱申联质谐测定，外标法定量。

3试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。

3.1乙腈：高效液相色谱级。

3.2甲醇：高效液相色谱级。

3.3甲酸：高效液相色谱级。

3.4氢氧化钠。

3.5磷酸二氢钠。

3.60.1mol/1.氢氧化钠溶液；称取4g氢氧化钠，并用水稀释至1L。

3.7甲醇水溶液：甲醇-水(2+8,体积比)。

3.8磷酸盐缓冲溶液：溶解13.8g磷酸二氢钠于950ml.水中，用0.1moL./L.氯氧化销溶液调节溶液pH值到8.0,最后用水稀释至11..

3.9螺旋霉素、替米考星、竹桃得素磷酸盐、秦乐菌素酒石酸盐、红霉素、罗红霉素、交沙霉素标准品；纯度大于等于95%,参见附录A表A.1

3.107种大环内酯标准储备溶液：称取适量标准品(3.9),分别用甲醇溶解，溶液浓度为100g/ml,

1℃~4℃冰箱保存。有效期三个月。

3.11标准工作溶液：根据需要用空自样品溶液将标准储备液稀释成2.5ng/mL,5ng/ml.,10ng/mL,

50ng/mL,100ng/mL.的混合标准工作溶液，相当于样品中含有5pg/kg、10pg/kg,20pg/kg、100pg/kg,200rg/kg大环内酯。

3.12C固相萃取小柱，500mg或相当者，使用前依次用5ml.甲醇，5ml.水预洗。

4仪器和设备

4.1高效液相色谱-串联质谐仪：配有电喷雾离子源。

4.2旋转蒸发器。

4.3固相萃取装置。

4.4高速离心机；7000r/min。

4.5pH计。

0.15%甲酸水溶液/%

0

20

80

2

20

80

7.5

80

2

7.6

95

5

8.7

95

5

8.8

20

8

14

20

80

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6.3.2液相色谱-串联质谐测定

根据试样中被测样液的含量情况。选取待测物的响应值在仪器线性响应范围内的浓度进行测定，如超出仪器线性响应范围应进行稀释。在上述色谐条件下螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、泰乐菌素、红霉素、罗红霉素、交沙霉素的参考保留时间分别约为9.2min,9.6min,10.0min,10.2min,10.1min,10.6min和11.0min,标准溶液的选择性离子流图参见附录C中图C.1。

6.3.3液相色谱串联质谱确证

按照液相色谱-中联质谱条件测定样品和标准工作溶液，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中待测物质的保留时间偏差在±2.5%之内。定量测定时采用标准曲线法测定。定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。

表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度/%

>50

>20~5

>10~20

≤10

允许的相对偏差/%

±20

±25

±30

±50

6.3.4空白试验

除不加试样外，均按上述操作步骤进行。

7结果计算和表述

用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中大环内酯的残留含量，计算结果需扣除空白值；

(1)

式中；

X——试样中大环内酯类抗生素残留量，单位为微克每千克(pg/kg):

c;——从标准曲线上得到的大环内酯类抗生素残留量的溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);V——样液最终定容体积，单位为毫升(mL);

w——最终样液代表的试样质量，单位为克(g)。

8方法的测定低限(LOQ)和回收率

8.1测定低限

大环内酯类抗生素残留量测定低限为10xg/kg。

8.2回收率

回收率见表3,

表3回收率的实验数据(在不同添加浓度范围内)

化合物

添加浓度/(jg(kg)

国收率范围/%

螺旋毒素

10

74.9-105.0

20

72.0--102.0

100

73.5~105.3

替米考星

10

74