组织化学技术教程1.pptVIP

〔内部教材，仅供参考〕序言现代组织化学是介入细胞生物学、组织形态学、化学与生物化学及分子生物学之间的一门新兴边缘学科，它已渗透和应用于生命科学的许多学科。近几十年来，组织化学的开展，突飞猛进，日新月异，已产生了许多分支，而各类分支虽有特点，但都源于组织化学。因此，组织化学已成为医学生物学科研过程中必备知识之一。第一章????绪论一、组织化学开展简史Klebs(1868)和H.Stuve1872)用愈创木酯酊同脓作用产生蓝色证明组织中有过氧化物酶的存在；P.Ehrlich(1885)发现了细胞色素氧化酶；R.Heidenhain(1868)指出动质〔ergastoplasm〕—核糖核酸是一种嗜硷性物质，可被醋酸沉淀；F.Miescher(1873)利用甲绿对核染色质的选择性亲和力，别离出核染色质。此间，金属盐法，硫化钴法，偶氮色素法，偶氮色素四唑盐法〔tetrazoliumsaltsmethod〕以及磷酸化酶组织化学证明法等相继问世。特别是H.Scheldon和D.Brandes等人把电镜与酶组织化学结合起来，以金属沉淀法观察了酸性磷酸酶和硷性磷酸酶，奠定了电镜酶组织化学〔electronmicroscopeenzymehistochemistry〕根底。后来A.M.Seligman(1967)提出锇黑化法〔Osmificationmethod〕进一步阐述了电镜组织化学的根本原理和反响过程。1950年A.H.Coons等人提出了荧光抗体法，从而把免疫学引入组织化学实验中，后来P.K.Nakane，S.Avrameas和L.A.Sternberger等人以辣根过氧化物酶为标记物对酶进行观察，创立了酶标抗体法，从而为组织化学开辟了新途径。1．尽可能地保持组织和细胞生前的形态结构、化学成分和酶的活性。为此必须选择适当的固定液和恰当的处理方法，如冷冻枯燥、冰冻替代、恒冷箱切片、振动切片等。2．化学反响要求在细胞或组织内进行，须有定位的准确性。为此必须控制反响的时间和条件，使反响的产物不移位，不弥散。3．反响物须有显色性和定量的可能性，即必须是有色的沉淀或结晶，沉淀颗粒细小连续、色深、不溶，并能保存在原位上。颜色深度要与物质含量或酶的活性具有一定的比例关系。4．反响物要有稳定性和重复性，以利于观察研究和验证。5．反响物有灵敏性和特异性,以利于比照观察。6．反响产物有对照，否那么难以判断其结果的可靠性。第二章组织化学根本理论