(3)--3原核细胞DNA复制分子生物学及常用技术.ppt

BacterialDNAreplication原核生物DNA的复制

DNA聚合酶I(codedbypolA)不是复制大肠杆菌染色体的主要聚合酶，它有3’→5’核酸外切酶活性,保证了DNA复制的准确性。DNAPolymeraseI它的5’→3’核酸外切酶活性也可用来除去冈崎片段5'端RNA引物，使冈崎片段间缺口消失，保证连接酶将片段连接起来。

DNA聚合酶II(codedbypolB)的活性很低，只有DNA聚合酶I的5%，所以也不是复制中主要的酶。生理功能主要是起修复DNA的作用。DNAPolymeraseII

DNAPolymeraseIIITheholoenzymeconsistsof:Thecoreenzyme–α,ε,θTheslidingclamp-?Theclamploadercomplex–γχδδ’ψAprocessivityswitch-τ是大肠杆菌DNA复制中链延长反应的主导聚合酶。

DNA聚合酶I(DNA损伤的修复）DNA聚合酶I、II、III(aproofreadingactivity)DNA聚合酶III

拇指域手指域palm手掌域

DNAhelicasesseparatethetwostrandsofthedoublehelixDNA双螺旋的解旋

BindingofSSBtoDNAinhibitstheformationofintramolecularbasepairsDNA双螺旋的解旋

ActionoftopoisomeraseatthereplicationforkTopoisomeraserapidlyremovethepositivesupercoilsaccumulateinfrontofthereplicationfork.

参与DNA复制起始和引发的蛋白质DNA解旋酶(DNAhelicase)催化DNA双链的解链过程。单链DNA结合蛋白(singlestrandDNAbindingprotein)：以四聚体形式存在于复制叉处，只保持单链的存在，并不能起解链作用。DNA拓扑异构酶(DNAtopoisomerase)消除DNA双链的超螺旋堆积。引物酶(primase)合成一小段RNA引物，为DNA新链的合成提供3’-OH末端。

一、复制的起始二、复制的延伸三、复制的终止DNA复制的基本过程

DNA复制在生物细胞中要从DNA分子上特定位置开始。这个特定的位置就称为复制起点(Originofreplication)，用ori表示Initiation复制起始

（1）OriCinE.colichromosomalDNA大肠杆菌的DNA复制起点?四个9bp的重复序列dnaA结合位点?三个13bp的重复序列若干GATC位点

由大肠杆菌oriC复制起始点处引发的DNA复制过程大约20个DnaA蛋白在ATP的作用下与oriC处的4个9bp保守序列相结合。在Hu蛋白和ATP的共同作用下，DnaA复制起始复合物使3x13bp直接重复序列变形，形成开链。DnaB（解链酶）六体分别与单链DNA相结合（需要DnaC的帮助）进一步解开DNA双链。与引物结合，起始DNA复制。↓↓↓

DNA链的延伸需要的蛋白质:DNA聚合酶滑动夹（SlidingDNAclamp）RNA酶(RNaseH等)在复制完成后切除RNA引物。DNA连接酶(DNAligase)通过生成3’5’-磷酸二酯键连接两条DNA链。2.DNA链的延伸

DNApolymeraseⅢ催化链的延伸

持续合成

DNAPolIII全酶Threeenzymes:TwocopiesoftheDNAPolIIIcoreenzymeOnecopyoftheγ-complex

长号模型前导链DNA聚合酶后随链DNA聚合酶DNA解旋酶单链结合蛋白

RNA引物DNA引物酶

RemovalofRNAprimersfromnewlysynthesizedDNARNAseHremovesalloftheRNAprimerexcepttheribonucleotidedirectlylinkedtotheDNAend.Anexonucleaseremovesthefinalribonucleotide.DNApolymerasefillsthegap,leavingaabreakinthebac