(27)--7. 重组体的筛选-插入失活法.ppt

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重组体的筛选-插入失活法

受体菌条件：安全宿主菌限制酶和重组酶缺陷处于感受态(competent)导入方式：转化(transformation)转染(transfection)感染(infection)重组DNA转入受体细胞磷酸钙转染DEAE葡聚糖介导转染电穿孔脂质体转染显微注射

例：溶菌时，裂解的DNA片段被另一细菌摄取，重组后外源片段整合入基因组DNA中，从而使培养的受体细胞获得新的遗传表型。外源DNA转入受体细胞

在转化前，细菌要先用CaCl2处理细菌，使其成为感受态细胞。其转化效率可达106～107转化子/μgDNA。重组质粒导入细菌的转化过程

IsolationofDNAfragmentsfrom?amixturebycloninginaplasmidvector.含有重组质粒或空载体的抗生素抗性菌落

TypeITypeIITypeIII在转化过程中我们会得到三种细胞

插入失活法

amps,tetsampr,tetrampr,tetsTypeITypeIITypeIIIs-sensitiver-resistant

ampicillintetracyclineTypeII,IIITypeIITypeIII

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