(27)--7.1重组DNA技术分子生物学.ppt

目录谢谢观看重组DNA技术第二节又称：分子克隆——在体外将目的DNA与能自主复制的载体连接，形成重组DNA分子——重组DNA分子在受体细胞中复制、扩增及克隆，从而获得DNA分子的拷贝重组DNA技术一、工具酶一、重组DNA技术中常用的工具酶常用工具酶主要包括：限制性核酸内切酶DNA连接酶DNA聚合酶逆转录酶一、工具酶限制性核酸内切酶三种类型：I型、II型、III型其中RE和DNA连接酶是最常用的工具酶特点：——I型和III型酶为复合功能酶，同时具有限制和DNA修饰两种作用，且不在所识别的位点切割DNA（即特异性不强）——II型酶能在DNA双链内部的特异位点识别并切割，故其被广泛用作“分子剪刀”，对DNA进行精确切割第一个字母取自产生该酶的细菌属名，用大写；第二、第三个字母是该细菌的种名，用小写；第四个字母代表株；用罗马数字表示发现的先后次序。命名：HindⅢ属系株序Haemophilusinfluenzaed株流感嗜血杆菌d株的第三种酶一、工具酶识别位点通常为6或4个碱基序列，个别的限制核酸内切酶识别8或8个以上碱基序列大多数限制核酸内切酶的识别序列为回文结构EcoRI:GAATTCII型限制核酸内切酶的特点：二、载体二、重组DNA技术中常用的载体载体——是为携带目的外源DNA片段、实现外源DNA在受体细胞中无性繁殖或表达蛋白质所采用的一些DNA分子按其功能可分为两类：克隆载体表达载体二、载体（一）克隆载体用于扩增克隆化DNA分子克隆载体——是指用于外源DNA片段的克隆和在受体细胞中扩增的DNA分子。克隆载体的基本特点：?至少有一个复制起点使载体能在宿主细胞中自主复制，并能使克隆的外源DNA片段得到同步扩增；?至少有一个选择标志，从而区分含有载体和不含有载体的细胞，如抗生素抗性基因、?-半乳糖苷酶基因（lacZ）、营养缺陷耐受基因等；?有适宜的限制核酸内切酶单一切点，可供外源基因插入载体。二、载体质粒克隆载体——是重组DNA技术中最常用的载体质粒：——是细菌染色体外的、能自主复制和稳定遗传的双链环状DNA分子，具备作为克隆载体的基本特点例如：pUC18质粒载体二、载体表达载体——是指用来在宿主细胞中表达外源基因的载体依据其宿主细胞的不同可分为：原核表达载体真核表达载体（二）表达载体能为外源基因提供表达元件二、载体原核表达载体——用于在原核细胞中表达外源基因——除了具有克隆载体的基本特征外，还有供外源基因有效转录和翻译的原核表达调控序列，如启动子、核糖体结合位点即SD序列、转录终止序列等二、载体真核表达载体——除了具备克隆载体的基本特征外，所提供给外源基因的表达元件是来自真核细胞的。质粒真核表达载体的特点：?含有必不可少的原核序列，如复制起点、抗性基因、MCS等?真核表达调控元件，如真核启动子、增强子、转录终止序列、polyA加尾信号等?真核细胞复制起始序列?真核细胞药物抗性基因目录谢谢观看