(7)--第四章 DNA的复制分子生物学.doc

DNA的复制

第一节DNA复制的特点

一、DNA的半保留复制

DNA复制的可能机制：

全保留复制

散布式复制

半保留复制

二、复制的起点（Orient）

复制起点或复制原点，常用Ori或O表示。

复制起点的结构（以E.coli为例）

1、框架结构(Framestructure)

间隔序列变化大，识别序列较保守

2、有一系列的反向重复序列（回文结构），故易形成高级结构

3、有4个9bp的重复序列—“dna盒”

较保守，TTATNCANA，是OriC复制起始时dnaA蛋白的特异结合位点。

4、有3个13bp的重复序列

GATCTNTTNTTTT，dnaA蛋白结合位点，DNA融化解链。

5、有11个GA*TC序列

A的甲基化是必须的，若缺失，则复制功能受影响

复制起点的功能

复制的起动（主要功能）

控制复制（有些参与）

A、控制拷贝数

B、控制复制周期

C、控制复制方向

三、复制的方向

双向等速复制：E.coli、酵母、果蝇、哺乳动物

单向复制：动物线粒体

不对称复制：枯草杆菌DNA

复制子：生物体的单个复制单位，包含一个复制原点，也可能包括一个复制终点。通常，细菌、病毒和线粒体DNA都只含有一个复制子，而真核基因组含有多个复制子。

四、DNA复制的方式

1、复制叉式、“复制叉”、“复制眼”

2、θ型复制(Cairns复制)

1963年Cairns提出。E.coliDNA的复制为θ型复制。

3、滚环型复制

λ噬菌体：产生多联体尾巴

ΦX174：成环滚环型复制

4、D环型复制

线粒体和叶绿体的环状DNA

第二节DNA复制有关的酶和蛋白质

一、原核DNA聚合酶的种类

DNA聚合酶I（DNApolI）

DNA聚合酶II（DNApolII）

DNA聚合酶III（DNApolIII）

?

DNApolI

DNApolII

DNApolIII

结构基因

polA

polB

polC、dnaNXZQ

分子量

109kd

120kd

＞250kd

分子数/细胞

400

？

10—20

5'-3'聚合酶活性

+

+

+

3'-5'外切酶活性

+

+

+

5'-3'外切酶活性

+

-

-

新生链的合成

+

-

+

生物学活性大小

1

0.05

50

功能

复制修复

修复

复制

二、DNApolI的性质

DNApolI分子量为109kd，约1000个残基，由polA基因编码。

用枯草杆菌蛋白酶处理DNApolI，可获得两个片段。

大片段分子量为76kd，具有5'-3'聚合酶活性和3'-5'外切酶活性，被称为Klenow片段。

小片段分子量为34kd，具有5'-3'外切酶活性，为修复用酶。

DNApolI的6个结合位点

模板DNA的结合位点

引物结合位点

引物3'-OH位点，即聚合酶反应位点

底物dNTP结合位点

5'-3'外切位点

3'-5'外切位点（校正位点）

DNApolI的性质

1、5'-3'聚合活性

所有DNA聚合酶都有5'-3'聚合活性，其中，DNApolI的聚合活性最高，其聚合速率为1000bp/min。

2、3'-5'外切活性（校正作用）

不配对碱基的存在造成停止聚合反应，激活3'-5'外切活性，切除不配对碱基。当切除后外切活性终止，聚合活性恢复，新生链的延伸又重新开始。

3、5'-3'外切活性

DNApolI的5'-3'外切活性具有三个性质：

必须有5‘-P末端；

被切除的核苷酸必须是氢键配对的；

被切除的核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸，也可以是核糖核苷酸。

三、DNApolIII的性质

DNApolIII全酶由多亚基组成，至少有10种22个亚基，α2ε2θ2δ2γ2τ2δ‘χ2ψ2β2。其中，α、ε和θ三种亚基组成核心酶（coreenzyme）。

DNApolIII是体内DNA复制的主要酶类，是复制酶。

DNApolIII全酶的结构是一种非对称的二聚体（asymmetricdimer）

四、引物酶和RNA聚合酶

DNA复制需要一段RNA引物

引物是由引物合成酶或RNA聚合酶合成。

E.coli的引物酶分子量为60kd，由dnaG编码。

引物合成系统：引物合成酶、DnaB、DnaC、n、n'、n''、i

RNA聚合酶

RNA聚合酶主要在M13、f1等单链DNA模板的特定位点起始引物合成。

一些大肠杆菌噬菌体和质粒编码自己的引物合成酶。如T4、T7等。T4的基因41/61、T7的基因4的编码产物具有引物合成酶的能力。

五、解螺旋酶

解螺旋酶I、II、III：结合在双链DNA的后滞链模板上，以5'-3'方向移动。

Rep蛋白：由rep基因编码，结合在前导链模板上