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个旧矿粉诱导支气管上皮转化细胞差异表达基因的克隆和鉴定的开题报告

题目：个旧矿粉诱导支气管上皮转化细胞差异表达基因的克隆和鉴定

一、研究背景

个旧矿区是中国云南省的一个重要矿区，矿区内存在大量的矿粉和重金属污染物，这些污染物对周边生态和人类健康带来了不可忽视的危害。

支气管上皮转化是一种导致癌前病变和其他疾病的过程。矿物纤维尤其是石棉纤维已被证明是导致支气管上皮转化的主要危险因素之一。个旧矿区由于存在大量矿粉，因此也可能导致支气管上皮转化。

因此，本研究旨在通过克隆和鉴定不同表达的基因，探究个旧矿粉对支气管上皮转化的影响。

二、研究目的

1.通过克隆方法，确定个旧矿粉诱导支气管上皮转化细胞的差异表达基因。

2.通过鉴定方法，验证差异表达基因在支气管上皮转化中的作用。

三、研究方法

1.细胞培养：采用支气管上皮细胞系，分为矿粉处理组和对照组。矿粉处理组细胞在培养基中添加不同浓度（0.5mg/ml,1.0mg/ml,1.5mg/ml）的矿粉，对照组细胞仅在培养基中添加相同体积的PBS缓冲液。

2.RNA提取：采用RNA提取试剂盒从不同组细胞中提取总RNA。

3.cDNA合成：根据从总RNA中提取的mRNA，通过逆转录反应制备cDNA。

4.克隆：采用PCR克隆方法，对矿粉处理组和对照组的cDNA进行扩增和克隆。

5.鉴定：通过实时荧光定量PCR和Westernblot的方法，验证克隆的区别表达基因在支气管上皮细胞转化过程中的作用。

四、研究意义

本研究对于揭示个旧矿区的矿粉污染对人类健康的危害具有一定的参考意义。通过克隆不同表达基因，有助于深入了解支气管上皮细胞转化的分子机制，并为疾病的预防和治疗提供理论基础。

五、研究难点

本研究的难点在于个旧矿粉与石棉纤维存在很多相似之处，石棉纤维已被证明对支气管上皮细胞转化有着明显的作用，因此如何确定个旧矿粉对支气管上皮细胞的影响是本研究必须解决的难点。

六、可行性分析

本研究的方法可行，已有相关文献和实验证明，支气管上皮细胞系是一种适合进行支气管上皮转化的体外模型，PCR技术和实时荧光定量PCR、WesternBlot技术也已被广泛应用。因此，本研究的可行性较高。

七、预期结果

通过克隆和鉴定，预计可以获得个旧矿粉诱导支气管上皮转化细胞差异表达基因的信息，有助于揭示个旧矿区对人类健康的影响。

八、研究进度

本研究的进度表如下：

第一年：

1.收集文献，准备实验材料和设备。

2.细胞培养，收集细胞样本。

3.RNA提取和cDNA合成。

4.进行PCR扩增和克隆。

第二年：

1.实时荧光定量PCR和WesternBlot验证克隆的基因表达。

2.数据分析和论文撰写。

3.总结研究成果。

九、参考文献

1.GuhaN,etal.Areviewofhumancarcinogens-partC:metals,arsenic,dusts,andfibres.TheLancetOncology2013;14(5):390-91.

2.SunC,etal.Identificationofdifferentiallyexpressedgenesinnon-smallcelllungcancer.ChineseJournalofOncology2015;37(5):329-33.

3.WangL,etal.Geneexpressionprofilingrevealspotentialbiomarkersoflungadenocarcinoma.ChineseJournalofLungCancer2014;17(9):711-16.

4.YaoY,etal.DetectionofLungAdenocarcinoma-associatedGeneExpressionusingComputationalApproaches.ChineseJournalofOncology2014;36(10):752-58.