试验二质粒DNA电泳鉴定课件.pptxVIP

试验二质粒DNA电泳鉴定课件

CATALOGUE目录质粒DNA提取电泳鉴定结果分析注意事项

质粒DNA提取01

提取质粒DNA的基本原理是利用质粒在宿主细胞内的复制和分离，通过物理或化学的方法将质粒从宿主细胞中释放出来，并进行纯化，得到高纯度的质粒DNA。质粒DNA提取通常包括细胞裂解、质粒DNA的分离和纯化、以及质粒DNA的定量和定性分析等步骤。实验原理

含有质粒DNA的细菌细胞宿主细胞溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、氯化铯溶液、乙醇、异丙醇等试剂离心机、电泳仪、凝胶成像系统等仪器实验材料

细胞收集将宿主细胞收集至离心管中，离心去除培养基。分离质粒DNA将裂解液加入氯化铯溶液中，离心后取上清液，即为质粒DNA粗品。电泳鉴定将质粒DNA进行琼脂糖凝胶电泳，用凝胶成像系统观察并记录结果。细胞培养将宿主细胞在适宜的培养基中培养至对数生长期。细胞裂解加入溶液Ⅰ和溶液Ⅱ，混合均匀后加入溶液Ⅲ，使细胞裂解。纯化质粒DNA将质粒DNA粗品进行乙醇沉淀和异丙醇沉淀，离心后取沉淀，用适量的TE缓冲液溶解，即为高纯度质粒DNA。010203040506实验步骤

电泳鉴定02

聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）原理聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和交联剂N，N-甲叉双丙烯酰胺聚合而成，通过凝胶孔径的调节，实现对不同大小DNA分子的分离。实验原理质粒DNA经限制性内切酶酶切后，通过电泳分离，根据DNA片段的大小和电荷性