染色体病诊断技术.ppt

第159页,共183页，2024年2月25日，星期天脆性位点脆性X综合征为X连锁遗传，出现几率在男婴中为1/2500，主要成因可能是因为CGG三核苷片段重复数目的变化。第160页,共183页，2024年2月25日，星期天五.荧光原位杂交

Fluorescenceinsituhybridization,FISH分子细胞遗传学(MolecularCytogenetics)是近年来发展起来的一门学科,是传统的细胞遗传学与分子遗传学结合的产物,始于FISH用染料标记探针，与中期或间期染色体杂交后，依其荧光标记的强弱进行检测以确定基因在染色体上的位置,并能确定染色体是否畸变。

探针标记方法：直接标记（荧光或非荧光）间接标记（荧光抗体，信号放大）——常用第161页,共183页，2024年2月25日，星期天第162页,共183页，2024年2月25日，星期天DiagramaticrepresentationofFISHanalysisusingthreedifferentkindsofprobes第163页,共183页，2024年2月25日，星期天着丝粒探针第164页,共183页，2024年2月25日，星期天(一)荧光原位杂交的特点：

①快速；②信号强；③特异性高；④多色。

标记探针的物质：（1）生物素(biotin)/地高辛(digoxigenin)

——半抗原报告分子（间接标记）

（2）荧光物质（直接标记）

Cy2或FluorX(绿色)/Cy3(橙色)/Cy3.5(猩红色)/Cy5(红色)/Aqua(蓝色)

间接标记的信号检测（抗biotin或digoxigenin抗体上连接荧光物质）物质：

conjugatedtoavidinorantibodyofdigoxigenin

(1)Fluoresceinisothiocyanate(FITC)或Bidopy——绿色

(2)TexasRed,Rhodamine,——红色

(3)AMCA——蓝色

染色体复染的物质:

PropidiumIodide(PI)（红色），DAPI（兰色），quinacrine（绿色），chromomycineA3（绿色）

第165页,共183页，2024年2月25日，星期天第166页,共183页，2024年2月25日，星期天(二)染色体涂染探针(chromosomepaintingprobes)

整条染色体探针或染色体区带特异性探针

染色体涂染方法：

①正向(forward)：正常probe杂交到待检测的异常标本上；

②逆向(reverse)：分离异常染色体制备探针，杂交到正常标本上。

应用

①染色体数目和结构异常分析；

②不同物种间的同源性比较；

③白血病及其它肿瘤的染色体诊断和研究。

**不能用于间期FISH第167页,共183页，2024年2月25日，星期天第168页,共183页，2024年2月25日，星期天第169页,共183页，2024年2月25日，星期天

(三)FISH技术的应用

①基因（或DNA片段）的染色体定位；

②染色体数目与结构异常的检测；

③间期细胞遗传学（绒毛/羊水/）；

④肿瘤遗传学研究第170页,共183页，2024年2月25日，星期天FISH检测（chromosomepainting)染色体易位第171页,共183页，2024年2月25日，星期天FISHdiagnosisoftheinterstitialdeletioninPrader-Willisyndrome第172页,共183页，2024年2月25日，星期天FISHanalysisofunbalancedautosomaltranslocationinvolvingchromosome10第173页,共183页，2024年2月25日，星期天MulticolorFISHofaninterphasecell第174页,共183页，2024年2月25日，星期天多色FISHM-FISH技术第175页,共183页，2024年2月25日，星期天24differentchromosomepantingprobeslabeledwithcombi