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微生物试验室培养基的使用说明指引

培养基是液体、半固体或固体形式的，含自然或合成成分，用于保证微生物繁殖或保持其活力的物质。培养基的制备和使用是微生物试验室检测工作的紧要环节，培养基自身质量的优劣、保管是否恰当、配制使用是否正确等都直接影响到检测结果的准确性。

一、培养基的购置与验收

1.购置

从培养基自身的质量来看，不同生产厂家的产品，甚至同一厂家不同批号的产品都会存在差别。依据ISO/IEC17025《检测和校准试验室本领的通用要求》，对培养基的供应企业进行评价后选择合格的供应商，这是培养基购买过程中紧要的步骤。应选择产品市场信誉度高、有质量保证本领和服务保证本领的企业；企业是否通过了质量管理体系的认证是较为客观的评价指标。要求生产企业供应：培养基成分名称及产品编号、批号、使用前的pH、贮藏信息和有效期、性能评价和所用测试菌株、技术数据清单、质控证书以及必需的安全/危害数据等料子。

2.验收

购买的培养基到货后，应有专人做好接受和验收工作，应认真核对生产企业供应的资料、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。每批培养基到货物后都应对培养基的质量进行检测，满足检测方法规定的要求后方可投入使用。

二、培养基的储存

干粉培养基应保管在阴凉干燥处，要躲避阳光直射；未开瓶的培养基在室温下的最长保管2年，开瓶后的干粉培养基易吸湿，应注意防潮并在6个月内用完。应定期对储存中的培养基进行常规检查，如容器密闭性复查、第1次开封日期、内容物的感官检查，假如培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用。

三、培养基的制备

1.培养基用水

培养基制备用水应使用电阻率不小于30万cm的蒸馏水或与其同质的水，最好不使用离子交换器生产的去离子水。

2.称量

称量时要用专用的角匙，躲避交叉污染而影响检验结果；干粉培养基易吸潮，如有条件，尽量在湿度较低的房间称取培养基。

3.复水

复水时不得用铜锅或铁锅，以防有离子混入培养基中，影响微生物的生长；容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上，躲避在加热溶解过程中，培养基溢出；含有琼脂粉的培养基，在加热溶解之前可以浸泡数分钟；加热培养基时确定要进行搅拌，特别是琼脂类培养基。为躲避烧焦和沸腾溢出，对于少量的培养基最好使用沸水浴进行加热。烧糊的培养基营养物质被破坏，并可产生有毒物质，如发现焦化，或未溶解均匀前培养基有溢出，该培养基即不能使用，应重新制备。对于琼脂类培养基进行再溶化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热，最多只能加热两次，第二次再溶化后仍未用完的培养基应弃去。

4.灭菌

一般培养基采用湿热灭菌，即高压蒸汽灭菌，通常是121℃15min，含糖或特殊培养基，依照国家标准或生产商供应的说明灭菌。已配制好的培养基必需赶忙灭菌，躲避微生物生长繁殖而消耗养分，变化培养基的酸碱度。高温可破坏培养基的营养成分，还会使琼脂的凝胶强度下降，因此必需严格掌控灭菌温度和时间，而且不行重复灭菌。高压蒸汽灭菌锅的压力表等要定期进行检定，并定期采用生物指示菌法或化学变色纸片对灭菌效果进行验证。

5.pH测定

微生物必需在适合的pH范围内才略正常生长繁殖或体现其生物特性。培养基配方要求的pH为灭菌或消毒后的pH值，即培养基使用前的pH，并应在25℃温度下采用精密酸度计进行测量，固体琼脂培养基应以特殊的胶体表面测量电极进行测量。使用过程中，假如需要调整培养基的pH，应用1mol/LNa0H或lmol/LHCL调整，注意不行反复调pH，否则会影响培养基的渗透压。

6.配制好的培养基保管

灭菌以后培养基应当快速冷却至所需温度，躲避长时间保管在灭菌锅内，造成过度灭菌，影响培养基的营养成分或选择性效果。所配制的培养基的量，应当是在最长保管期限内正好使用完。含染料的培养基应闭光保管；倒好的琼脂平板假如配制的当天未使用完，应于冷藏保管，假如保管时间超出2天，应将其放入密封的塑料袋中保管；配好的肉汤类培养基假如保管时间超出2个星期，应将其放在带有螺旋盖的试管或其它密闭的试管或容器中防止蒸发。

四、培养基的性能测试

1.外观掌控

制备好的培养基应有相应的颜色，一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀。使用前应检查培养基的颜色是否发生更改，是否蒸发/脱水。

2.污染掌控

从每批制备好的培养基中选取部分进行污染测试（无菌试验），确定无微生物生长方可使用。

3.性能测试

（1）测试菌株选择测试菌株是具有其代表种的稳定特性并能有效证明试验室特定培养基最佳性能的一套菌株，应来自国际/国家标准菌种收藏中心ATCC标准菌株，菌株的选择参考卫生行业标准WS/T232—2024《商业性微生物培养基质量检验规程》。

（2）定量测试方法（改良Miles—Misra法）测试菌株过夜培