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《3种人参根系分泌物的成分比较及化感效应分析》

工作的精确性和系统性[11-12]。因此，本研究对3种不同抗性品种人参根系分泌物进行对比研究，对根系分泌物成分进行GC-MS质谱鉴定，其中对具有较强化感毒性的物质阿魏酸进行了相对定量分析，并引入外源阿魏酸和不同品种人参根系分泌物对人参幼苗进行生理生化测试，旨在寻找耐连作人参品种和探索人参连作障碍的形成机制，为减缓连作障碍提供科学依据。

材料与方法

试验于2016年在吉林康美人参栽培基地进行，日常田间栽培管理。

根系分泌物的收集

从种植基地设置的不同品种耐连作化感定位试验中，选取连续种植7年人参品种吉黄果参、边参1号、吉参1号地块，分别标记为R1、R2、R3。上述品种采用日常田间种植方式，采取苗趴（播种育苗，用苗移栽后不再移动，直至收获）形式栽培人参，最大限度保证人参根系分泌物的原始成分不受干扰和破坏。每块试验地选择3个点，每点选取人参植株5株，小心抖干净根系附着土壤，将每点植株混合后，分别用500mL分析纯甲醇反复淋洗根系，将得到的根系分泌物4000r/min离心5min，然后将根系分泌物的甲醇溶液在35℃下用旋转蒸发仪

50℃真空减压浓缩定容至10mL，4℃冷藏，备用。

根系分泌物的衍生化

用氮吹仪在35℃下将10mL制备好的根系分泌液风冷吹干，并进行硅烷衍生化。硅烷化过程参照刘应蛟等的方法[13]，硅烷化过程在6h内完成。

根系分泌物的定性和定量分析

采用GC-MS方法分析鉴定。采用Agilent公司的Trace-ISQ型气相色谱-质谱联用仪鉴定。气相色谱和质谱测定方法参照郭华等的方法[14]。通过GC-MS分析后得到总离子流色谱图，采用标准质谱库定性，通过计算机在检索系统进行物质的鉴定，应用标准图库（NIST2015WILEY）質谱数据库查找核对并结合人工分析进行物质的鉴定。

定量分析：已有研究表明阿魏酸是人参根系分泌物中重要的化感物质，配制阿魏酸的0.10、0.20、0.50、1.00、2.00mg/L的吡啶溶液，每个梯度3次重复进样，以浓度为横坐标，以

重复样的峰面积平均值为纵坐标，进行线性回归分析，根据各组分的保留时间确定物质的色谱峰面积，通过峰面积和质量浓度关系建立标准曲线，由标准曲线的回归方程计算得到阿魏酸的质量浓度。

根系分泌物原液及外源化感物质的自毒效应

通过生物检测验证人参根系分泌物对人参苗生长的影响。将按“1.1”节方法收集到的不同品种人参根系分泌物蒸馏水定量稀释为50mL，用细菌过滤器过滤后每24h浇灌1次已催芽人参种子，测定发芽率，发芽率方法参照王菡等的方法[15];配制0.20mg/L阿魏酸的甲醇溶液供后续试验。2年生人参苗用自来水将根部泥土洗净消毒，尽量减少对人参根部的伤害，25%多菌灵500倍液浸泡15min，无菌水反复冲洗，种植于未受污染的新林地土中，每小区3m2，日常田间管理方式。培养30d后开始浇灌根系分泌物及外源化感物质阿魏酸，每次每株加10mL处理液，以甲醇为对照（CK），共5个处理，分别记作CK、R1、R2、R3、A1，每处理重复3次，每隔5d浇灌1次处理液。60d后调查人参株高、叶长、叶宽和须根数及测定各项生理生化指标。计算化感效应指数采用Williamson等的方法进行。酶活性、光合色素含量与内源激素测定参照李合生的植物生理学试验指南方法[16]进行。

结果与分析

人参根系分泌物的成分鉴定

不同品种人参根系分泌物的总离子质谱图比较相似，但峰面积大小不同。对总离子质谱图通过计算机检索系统鉴定，按照相似度大于70%、峰面积大于500000，得到不同品种人参根系分泌物的主要物质（表1）。各处理中剔除三烯丙基异氰脲酸酯影响，前述试验已证明这种物

质为人参栽培所用塑料薄膜中的增塑剂分解物质;同时剔除五氯硝基苯，为残留农药分解产物。这2种物质不能归类为化感物质。

从R1、R2和R3人参根系分泌物中分别鉴定出47种、41种和48种化合物，各处理根系分泌物中以有机酸类物质种类最多，相对丰度占比最大，R1和R3有机酸含量比R2高。在鉴定的化感物质中，酯类、醇类占比也较大。在鉴定出的众多化合物中，阿魏酸是已被证实是人参连作障碍中重要的化感物质之一，从R1、R2和R3人参根系分泌物中鉴定到的阿魏酸相对丰度分别为2.59%、1.89%和2.75%。

人参根系分泌中阿魏酸的定量

根据不同质量浓度阿魏酸GC-MS图中峰面积和浓度的关系，建立阿魏酸标准曲线图。根据阿魏酸标准曲线图，依据不同品种人参根系分泌物中阿魏酸的峰面