(12)--4.5 糖的生物医学应用.ppt

糖的标记一糖类疫苗二糖芯片三糖类药物四第五节糖的生物医学应用

一、糖的标记荧光分子同位素荧光蛋白标记

了解细胞表面糖基化和人类疾病之间的关系是糖生物中的一大热点问题。糖类分子自身没有发色基团，为了有效地检测糖链，往往需要对其进行标记或衍生化。因此，细胞表面的糖标记手段对于阐述糖类化物和疾病的关系有重要的生物学意义。通常可以将荧光分子、同位素或荧光蛋白与糖结合在一起，起到标记作用。

Click反应是最有效的标记法。步骤：将被官能化（叠氮化）修饰过的单糖分子通过生物的同化作用，酶催化下引入到缀合物中；通过正交性反应将荧光分子以共价方式结合到糖缀合物中。

细胞表面糖标记的基本策略是采用生物正交性的连接反应将可以监测的荧光分子结合到含有反应活性官能团的糖类分子上。目前存在多种满足此条件的生物正交性的连接反应，叠氮与炔基的点击反应被证明是标记细胞表面糖基化物的非常有效的方法。同时，最为适用的反应官能基团是叠氮官能团，因为天然的生物体内不含有叠氮基团，同时叠氮十分稳定，在大多数生物转化或化学反应中都能稳定存在。细胞表面糖标记过程大体分为两个步骤。首先，实现细胞表面糖基的官能化。这个过程一般是将已被官能团（如叠氮化）修饰过的单糖分子通过生物的同化作用，在体内自身酶的催化下引入糖缀合物中；其次，通过生物正交性反应将荧光探针分子以共价方式结合到糖缀合物中。传统的点击化学反应需要铜催化，但是由于铜具有细胞毒性，所以不能直接用于体内的糖基标记。Bertozzi发展出无铜的由环张力诱导的点击化学，能够在体内方便地实现糖基化合物的标记。

疾病与糖基表达与自由基相关的疾病，与铁转移蛋白糖基化水平过高有关。如帕金森、风湿关节炎。肿瘤高抗药性，细胞膜上P糖蛋白过度表达，将胞内的抗肿瘤药物泵出细胞。

许多疾病与糖基的异常表达相关。例如，帕金森病、风湿性关节炎和其他与自由基相关的疾病与铁转移蛋白糖基化水平过高相关。肿瘤细胞具有较高的抗药性的重要原因是细胞膜上P糖蛋白的过度表达，这类蛋白质能将细胞内的抗肿瘤药物泵出细胞外。通过细胞表面糖基的标记，可以实现肿瘤生长和与其他相关的糖代谢的可视化观察。

二、糖类疫苗

糖基化表达异常发病糖类作为抗原决定簇引起免疫反应疫苗

糖基化是蛋白质的翻译后修饰中比较常见的行为。在病理过程中，承载重要生物功能的糖链通常会异常表达（高表达）以及异种生物糖链的特异性表达。因此，糖类化合物常作为抗原决定簇引起体内特异性免疫反应，产生针对病原的抗体。基于此，最近糖类疫苗取得了较大的发展。科研工作者正从事多种疫苗的研发工作，如细菌荚膜多糖疫苗、肿瘤疫苗、HIV疫苗和寄生虫疫苗等。

产生多种抗肿瘤抗体疫苗抗原决定簇开发糖类疫苗的前提是获得特定结构的糖修饰蛋白。最近，寡糖的合成化学取得了骄人的进步，科研工作者可以将多个B-细胞糖抗原决定簇缀合在同一个疫苗分子中，有希望产生针对多种肿瘤细胞的特异性抗体，实现对肿瘤的预防和治疗。

多糖免疫应答使病原体逃避宿主的免疫监控免疫应答保守结构多糖

通常病原体能逃避宿主的免疫监控是因为其外壳被一层具有弱免疫原性的多糖包裹。此类细菌荚膜多糖具有高度保守的结构和可靠的免疫应答。因此，这种疫苗在感染性疾病控制方面取得了很大的成功。例如，抵御b型流感嗜血杆菌感染的ProHIBiT多糖疫苗、婴儿肺炎和脑膜炎预防的Quimi-HB或Theratope疫苗都已经取得了巨大的成功。

影响糖疫苗效率的因素抗原决定簇的糖基化形式、构象与蛋白抗体的相似性；糖的免疫原性低，只能作为半抗原，要发展有免疫原性的糖类疫苗，结合蛋白等。免疫原性：抗原能诱导机体产生体液免疫或细胞免疫应答的性能。半抗原：具有抗原性，但只有与载体结合才能引起机体产生免疫反应的抗原物质。有机化学免疫学

影响糖类疫苗效率的因素有很多。首先，作为引起体内免疫应答的抗原决定簇的糖基化形式、构象及与之相关的多肽序列和天然蛋白抗体的相似性大大影响了产生抗体的有效性；其次，糖的免疫原性低，只能作为半抗原，需要各种策略来制备有免疫原性的糖类疫苗，结合的蛋白质以及辅助剂对疫苗的效率都有很大的影响。因此，研发有效的糖类疫苗是比较庞大的工程，需要合成有机化学和生物免疫学的紧密结合。

三、糖芯片糖结合蛋白糖特异识别特点：高通量、自动化所需样品少多个样品检测

糖芯片（又称碳水化合物微阵列）是一种生物芯片，根据糖结合蛋白和糖之间的特异性识别作用，将糖或其复合物固定在芯片之上，采用此负载糖的芯片与蛋白质杂交，检测信号，分析糖与蛋白质的相互作用。糖芯片所需样品少，可以同时检测多个样品。此外，还具有高通量、标准化和自动