Necl家族蛋白胞外区的表达纯化与胞内区相互作用蛋白的筛查的中期报告.docxVIP

Necl家族蛋白胞外区的表达纯化与胞内区相互作用蛋白的筛查的中期报告

本实验在Necl家族蛋白的研究基础上，探索了其胞外区的表达纯化方法，以及胞内区与可能相互作用的蛋白进行了筛查，并取得了一定的进展。

一、Necl家族蛋白胞外区的表达纯化

1.实验设计

根据Necl家族蛋白的结构图，设计了一个包含胞外区的重组蛋白的表达载体pET-28a-Necl。利用该载体在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达纯化，同时设立含His-tag的阳性对照组WT，以及不含His-tag的阴性对照组NC。

2.方法步骤

(1)构建重组蛋白表达载体：将Necl家族蛋白胞外区cDNA克隆到pET-28a表达载体中，构建出pET-28a-Necl家族蛋白胞外区表达载体。

(2)大肠杆菌BL21（DE3）的感受态产生：利用含pET-28a-Necl家族蛋白胞外区表达载体的感受态大肠杆菌BL21（DE3）进行表达。

(3)诱导表达：在感受态大肠杆菌BL21（DE3）生长至OD600值为0.5时，加入IPTG诱导表达。

(4)收获细胞：24小时后，离心收获细胞，通过提取细胞裂解液获得重组蛋白。

(5)His-tag纯化：通过His-bindresin纯化出含有His-tag的重组蛋白。然后对纯化样品进行SDS检测。

3.实验结果

通过含有His-tag的阳性对照组WT纯化出了重组蛋白，而不含His-tag的阴性对照