紫外-可见分光光2023年年度法P.pptVIP

主讲老师：陈郁生物制药技术专业教学资源库紫外-可见分光光度法

紫外-可见分光光度法及其应用紫外-可见分光光度法是在190~800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmin

紫外-可见分光光度法及其应用因此，可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸光度比值而鉴别物质。用于定量时，在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度（朗伯-比尔定律A=lg(1/T)=Kbc）。含量测定一般有以下几种方法：对照品比较法、吸收系数法、计算分光光度法、比色法。

基本结构图紫外-可见分光光度计结构图

比色皿须洁净01手指拿毛玻璃面的两侧02透光面用擦镜纸从上而下擦拭干净03柔红霉素使用多个比色皿时，需配对使用（透光率相差在0.3%以下）04氮芥比色皿注意事项波长小于300nm须使用石英比色皿05

紫外-可见分光光度计的校正1.波长：由于环境因素对机械部分的影响，仪器