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IT-ISJ标记在加工苹果品种遗传关系研究中的应用的中期报告

摘要：本文介绍了IT-ISJ标记在加工苹果品种遗传关系研究中的应用。IT-ISJ标记是一种新型的分子标记，具有优良的遗传多态性和灵敏度。本研究采用PCR技术对27个苹果品种的IT-ISJ标记进行分析，并利用数据分析软件进行聚类分析。结果表明：IT-ISJ标记在加工苹果品种间亲缘关系研究中有较高的应用价值。

关键词：IT-ISJ标记；加工苹果；遗传关系；聚类分析

引言

苹果是我国的主要水果作物之一，其果肉纤维细腻、口感嫩滑、味道甜美等特点深受人们的喜爱。当前，我国加工苹果产业发展迅速，但存在品种单一、生产水平低下等问题。因此，加强对各品种间遗传关系的研究，为其优化配对提供科学依据，对于提高加工苹果产业的质量和效益具有重要意义。

分子标记在现代分子生物学和遗传学研究中广泛应用，其中IT-ISJ标记具有广泛适用性、遗传多态性高等优点，成为目前研究苹果品种遗传关系的常用方法之一。

材料与方法

1、材料

27个加工苹果品种，PCR试剂盒，DNase，试剂酒精

2、方法

2.1DNA提取

苹果果实选取新鲜、无污染的果实进行分析。将苹果果肉切碎，加入10mMTris-HCl缓冲液，pH8.0，1mMEDTA，pH8.0和2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP）浸泡混匀10min,4000转/min旋转10min,继而加入5%DNase酶溶液浸泡30min，4℃下存放15min，离心取上清液，加入等体积的冷酒精，在-20℃下保存过夜，脱水过滤，干燥后加入TE缓冲液溶解。

2.2PCR扩增

选取IT-ISJ标记，设计引物，PCR反应具体条件参考以下表格：

表1PCR反应条件

程序温度（℃）时间

1955min

29430s

35530s

47230s

57210min

64无限制

2.3电泳分析

将扩增产物进行电泳分析，得出PCR产物的长度，进行图谱处理和聚类分析。

结果与分析

本研究选取了27个加工苹果品种，共扩增出44个IT-ISJ标记，在PCR反应后得出了一系列长度在200-1500bp左右的PCR产物。对此结果进行聚类分析，得出以下结论：

（1）27个苹果品种可分为三大类，其中第一类有15个品种，第二类有8个品种，第三类有4个品种。

（2）第一类品种的遗传距离较近，第二类品种的遗传距离较远，第三类品种的遗传距离较近。

（3）IT-ISJ标记可以用于加工苹果品种间亲缘关系的研究。

结论

本研究证明了IT-ISJ标记在加工苹果品种遗传关系研究中的应用价值，为探讨加工苹果品种间的亲缘关系提供了新的方法和途径。