NY-ESO-1特异性TCR基因转导人PBMC及转导后细胞功能研究的开题报告.docxVIP

NY-ESO-1特异性TCR基因转导人PBMC及转导后细胞功能研究的开题报告

一、研究背景

NY-ESO-1属于肿瘤抗原类，由于其在正常组织中的表达很少或不表达，而在多种恶性肿瘤中表达水平较高，因此成为一种重要的肿瘤免疫治疗靶点。目前，基于NY-ESO-1抗原作为肿瘤免疫治疗的靶点，已经成功研制出了多种相应的治疗方法，如NY-ESO-1特异性TCR基因转导T细胞治疗方法，该方法可大量增强肿瘤患者免疫系统的特异性杀伤效应，对于肿瘤的治疗具有非常重要的意义。因此，我们希望研究NY-ESO-1特异性TCR基因转导人PBMC及转导后细胞功能，以期完善和优化NY-ESO-1靶向免疫治疗技术。

二、研究目的

1.构建NY-ESO-1特异性TCR基因载体，利用介质的方式将NY-ESO-1特异性TCR基因导入PBMC中。

2.分析NY-ESO-1特异性TCR基因转导PBMC后的细胞生物学特性，如增殖率、细胞凋亡率等。

3.评价NY-ESO-1特异性TCR基因转导PBMC后的细胞功能，如细胞对NY-ESO-1的识别和杀伤效能等。

三、研究内容与方法

1.构建NY-ESO-1特异性TCR基因载体

利用基因克隆技术，构建NY-ESO-1特异性TCR基因载体。该基因载体由NY-ESO-1抗原特异性T细胞受体的亮链和重链组成，并含有启动子、增强子和标签等功能区。

2.将NY-ESO-1特异性TCR基因导入PBMC中

采用脂质体介导的转染方法，将NY-ESO-1特异性TCR基因导入PBMC中。转染后，通过PCR和Westernblot等方法，确认PBMC中是否成功导入了NY-ESO-1特异性TCR基因。

3.分析NY-ESO-1特异性TCR基因转导PBMC后的细胞生物学特性

收集NY-ESO-1特异性TCR基因转导PBMC后的细胞，利用光学显微镜观察细胞形态变化，比较其增殖率、细胞周期和细胞凋亡率等生物学特性与未转导对照组的差异，以确保NY-ESO-1特异性TCR基因导入PBMC后，细胞仍具有正常的生物学特性。

4.评价NY-ESO-1特异性TCR基因转导PBMC后的细胞功能

利用细胞杀伤试验，比较NY-ESO-1特异性TCR基因转导PBMC对NY-ESO-1阴性和阳性肿瘤细胞的识别和杀伤效能与未转导对照组的差异，评价NY-ESO-1特异性TCR基因导入PBMC后，细胞是否具有相应的识别和杀伤效能。

四、预期研究结果

通过本次研究，可以产生NY-ESO-1特异性TCR基因载体，并成功完成PBMC中NY-ESO-1特异性TCR基因的导入。同时，查看PBMC中NY-ESO-1特异性TCR基因导入后，细胞生物学特性依然正常。通过细胞杀伤试验结果，评估NY-ESO-1特异性TCR基因转导PBMC后，细胞对NY-ESO-1的识别和杀伤效能。这些数据可以为完善和优化NY-ESO-1靶向免疫治疗技术提供理论基础和实验数据支持。