第9章 DNA序列分析课件.pptVIP

第九章DNA序列分析;;;;;;;;序列测定的技术;第一节Maxam-Gilbert化学降解法;碱基特异性化学切割反应：

硫酸二甲酯（DMS）：使DNA分子中鸟嘌呤（G）上的N7原子甲基化。

肼：使DNA分子中胸腺嘧啶（T）和胞嘧啶（C）的嘧啶环断裂；但高盐条件下，只C断裂，而不与T反应。

哌啶：从修饰甲基处断裂核苷酸链。

在不同的酸、碱、高盐和低盐条件下，三种化学试剂按不同组合可以特异地切割核苷酸序列中特定的碱基。

;G反应：DMS使G在中性和高温条件下脱落。

G+A反应：酸性条件（如甲酸）可使A和G嘌呤环上的N原子质子化，利用哌啶使A、G脱落。

T+C反应：肼（低盐）

C反应：肼（高盐）

测定DNA长度~250bp。

;化学裂解法测定DNA的核苷酸序列;第9章DNA序列分析;第二节Sanger链终止法;与PCR反应类似。

反应体系中包含：模板DNA,Taq酶,dNTPs,ddNTPs和测序引物；

反应过程：

变性－复性－延伸－终止

;Dideoxynucleotides

（双脱氧核苷酸）;*;第9章DNA序列分析;二、双脱氧终止法测序反应体系：;Sanger法DNA测序的试剂

①引物：通常由20-23个碱基构成，G+C=12，A+T=8到11，Tm=60-68℃，避免形成引物二聚体或形成发卡样结构

②模板

③DNA聚合酶