固定化酶总结.ppt

关于固定化酶总结*超声对酶促反应的影响（一）Stephen等研究了超声对α-淀粉酶，淀粉葡萄糖苷酶，蔗糖转化酶酶促作用的影响。将底物和相应的酶置于超声水浴中反应一定时间后，用DNS试剂与生成的还原糖反应，测定其吸光值。考察不同底物浓度与反应速率之间的关系。以非超声条件下的酶促反应速率作为对照。第2页,共12页，2024年2月25日，星期天*第3页,共12页，2024年2月25日，星期天*第4页,共12页，2024年2月25日，星期天*超声增加α-淀粉酶和淀粉葡萄糖苷酶的酶促反应速率。原因很可能是超声提高了反应温度，使酶与底物分子更充分的混合，从而利于酶促反应的发生。蔗糖转化酶在水解蔗糖的过程中有底物抑制作用，超声能够有效降低这种作用的影响。原因是超声可能影响其底物分子和溶剂水分子的分子间作用。第5页,共12页，2024年2月25日，星期天*超声对酶促反应的影响（二）Kawasaki使用特定频率的超声波，通过调节多肽的动力学控制酶促反应。其研究考察了嗜热菌蛋白酶和DNA聚合酶的酶促反应。对于嗜热菌蛋白酶，几百kHz的超声强度能够促进其酶促反应。研究DNA聚合酶的反应时使用了石英晶体微天平技术（它是一种非常灵敏的质量检测仪器，其测量精度可达纳克级，比灵敏度在微克级的电子微天平高100倍，理论上可以测到的质量变化相当于单分子层或原子层的几分之一。）监测Klenow片段连接到DNA模板后，模板质量的变化，从而研究酶促反应的动力学。第6页,共12页，2024年2月25日，星期天*研究固定化酶的酶促反应Ghiaci等分别用钠基膨润土和改性膨润土对碱性磷酸酯酶固定化，研究不同实验条件下固定化酶的反应活性。研究充分考虑到酶浓度，pH，温度，搅拌和变化的热力学参数对酶促反应的影响。酶促反应在0.1M磷酸盐缓冲液，pH7.0条件下最强。pH=10时达到最佳反应状态。4℃下磁力搅拌的最佳时间周期为2小时。第7页,共12页，2024年2月25日，星期天*实验过程1分别使用钠基膨润土和改性膨润土固定化碱性磷酸酯酶。2测定磷酸酯酶活性APhA磷酸酯酶催化pNPP磷酸对硝基苯酯生成pNP对硝基酚，37℃下反应1h后加入NaOH终止反应。410nm下测定吸光值。3测定动力学参数。KmVmax第8页,共12页，2024年2月25日，星期天*实验过程4检测稳定性储藏稳定性：4℃，50天；30℃，70天热稳定性：25-80℃水解稳定性：链酶蛋白酶37℃0-6天5研究pH值对酶促反应的影响6测定总蛋白含量：BSA法第9页,共12页，2024年2月25日，星期天*结果与讨论X射线衍射SEM投射电镜观察结构，孔径比表面积，孔容量，孔径——后两者影响酶促反应。孔容量和孔径越大，越利于酶的融入与固定化。孔容量和孔径小，会限制传质和酶的透过，发生边界吸收作用。Langmuir吸附等温线：量化碱性磷酸酯酶与膨润土之间的作用。膨润土的固定化能力：APhA；Protein计算反应动力学方程米氏方程第10页,共12页，2024年2月25日，星期天*结果与讨论pH值对酶促反应的影响磁力搅拌对酶促反应的影响固定化酶与游离酶的稳定性储藏稳定性热稳定性水解稳定性第11页,共12页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第12页,共12页，2024年2月25日，星期天