催化水解反应的金属酶.ppt

第21页,共40页，2024年2月25日，星期天Zn2+与多肽链的两个组氨酸（69,196）的咪唑基氮原子，以及谷氨酸（72）的羧基氧原子以配位键结合，第22页,共40页，2024年2月25日，星期天Zn2+第４配位为水。Zn2+处于畸变四面体配位状态中。第23页,共40页，2024年2月25日，星期天〔3〕功能：催化蛋白质或多肽的羧基末端肽键的水解反应。除了脯氨酸之外，羧肽酶能不同程度的催化具有各种C-末端氨基酸的肽链水解。底物的C-末端侧链为芳基或分支较大的脂基羧肽酶显示出很强的活性。―NH―CH―CO―NH―CH―COO-+H2O→||R2R1―NH―CH―COOH+NH2―CH―COO-||R2R1第24页,共40页，2024年2月25日，星期天2.肽水解的催化机理（1）活性部位早期的蛋白链化学修饰法已经确定羧肽酶的活性部位。Zn2+除与组氨酸（His-69)、-196，以及Glu-72形成直接参与催化作用的活性部位外，还包括Arg-145，Tyr-248和Glu-270，它们的侧联基团也是直接与底物结合的部位。当上述氨基酸与其他物质作用而被化学修饰时，酶失去活性第25页,共40页，2024年2月25日，星期天（2）锌-羰基机理主要特征：底物的C-末端肽键的羰基通过锌的配位作用而极化，极化羰基的碳原子由于亲核反应发生水解作用。第一步：Arg-145的胍基和底物的带负电荷的C-末端羧基相互吸引。第二步：底物酪氨酸残基的芳基侧链进入酶的非极性口袋形空腔中挤走4H2O。第三步:底物敏感肽键的-NH-基上的氮原子与酶的Tyr-248的-OH以氢键连结。第26页,共40页，2024年2月25日，星期天第四步：底物肽键上的羰基挤走了水分子而与锌配位，锌使羰基极化以致碳原子容易接受亲核进攻。第五步：底物末端的羰基碳原子通过一个插入的水分子与酶的谷氨酸Glu-270的侧链以氢键连结。但最后这一步不一定发生。羧肽酶与甘氨酰胺结合的过程，必须通过活性中心的重排，特别是酶分子的构象的重大改变才能实现。Arg-145和Glu-270移动0.2nm，Arg的位移带动了肽链的扭转，使Tyr-248移动了1.2nm。第27页,共40页，2024年2月25日，星期天诱导喫合状态：酶分子构象改变，配位键、范德华力、静电吸引力和氢键等作用力，使酶分子与底物在空间和电荷上都很匹配，因而处于喫合状态。羧肽酶与甘氨酰胺结合正是酶的诱导喫合状态的范例。酶分子构象改变和各种相互作用力使底物肽键处于张力状体下，因此，反应活化能大大降低。第28页,共40页，2024年2月25日，星期天第29页,共40页，2024年2月25日，星期天酶与底物结合后进一步反应的步骤有两种不同的观点。第一种：Glu-270激活了水分子，提高了水分子的氧的亲核能力，向底物肽健羰基的碳原子进攻，Glu-270羰基质子化，Tyr-248也提供一个质子，肽键断裂，底物分解。第30页,共40页，2024年2月25日，星期天第二种：第31页,共40页，2024年2月25日，星期天锌的作用：在锌-羰基机理中起了使肽键产生张力的作用，从而促进了底物的水解。由于Zn2+的作用，底物肽键的羰基碳原子的电子云密度降低而呈正电性，因此羰基碳原子更容易接受亲核进攻。底物末端羧基与Arg-145带正电的胍基连结，触发了Tyr-248大幅度位移，酶显示活性。由此可见：酶与底物的诱导喫合是一个互相识别的动态过程。这个过程发生活性中心重排，使底物有可能被酶的功能基包围而发生催化。第32页,共40页，2024年2月25日，星期天第三节：碳酸酐酶广泛存在动物、植物和某些微生物体内。可逆催化二氧化碳的水合作用，还能催化醛类水合作用和某些脂的水解。碳酸酐酶分含Zn2+酶和不含Zn2+酶。锌酶，红细胞中仅次于血红蛋白。第33页,共40页，2024年2月25日，星期天一、组成、结构、功能相对分子量约30000，单一肽链，每个分子含一个Zn2+，260个氨基酸残基，脯氨酸含量较高，没有二硫键。通