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高效液相色谱培训课件

目录contents高效液相色谱概述高效液相色谱仪器组成高效液相色谱分析方法高效液相色谱操作技巧高效液相色谱在各个领域应用高效液相色谱实验设计与数据分析

01高效液相色谱概述

高效液相色谱定义高效液相色谱（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）是一种分离和分析技术。它利用溶液中被分析物质在固定相和流动相之间分配系数的不同，使被分析物质在两相之间进行多次分配，从而达到分离的目的。

高效液相色谱原理进样器将样品注入到流动相中。输液泵提供流动相，使样品溶液在色谱柱中流动。HPLC系统由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据记录及处理装置等组成。色谱柱内填充有固定相，样品中的各组分在固定相和流动相之间反复分配，由于分配系数不同而得到分离。检测器对分离后的组分进行检测，并将信号传递给数据记录及处理装置。

自动化程度高现代的HPLC仪器配备了自动化进样、数据处理等功能，使得操作更加简便快捷。灵敏度高HPLC的检测器具有高灵敏度，可以检测到微量的组分。分析速度快HPLC的分析速度相对较快，一般分析一个样品只需几分钟到几十分钟。分离效能高由于采用了高效微粒固定相及高压流动相，使得HPLC的分离效能远高于普通液相色谱。选择性好通过选择合适的固定相和流动相，可以实现复杂样品中各组分的有效分离。高效液相色谱特点

02高效液相色谱仪器组成

提供稳定、连续的高压流动相，确保色谱柱内流动相的稳定流动。高压输液泵流动相贮液瓶梯度洗脱装置盛装流动相，通常有多个贮液瓶以适应不同分析需求。实现流动相组成的在线改变，提高分离效果。030201高压输液系统

将样品定量、准确地注入色谱柱，通常有手动和自动两种进样方式。进样器用于装载和注射样品，需定期清洗和更换。进样针确保每次进样的体积准确一致。进样环（定量环）进样系统

高效液相色谱的核心部件，实现样品的分离。根据分离原理不同，可分为反相色谱柱、正相色谱柱、离子交换色谱柱等。色谱柱决定色谱柱分离性能的关键因素，包括粒径、孔径、比表面积等。色谱柱填料保持色谱柱恒温，提高分离效果和重现性。色谱柱温箱分离系统

检测系统检测器将色谱柱流出的组分转换为电信号进行检测，常用检测器有紫外可见检测器、荧光检测器、电化学检测器等。检测池盛装流动相和样品，与检测器配合实现信号转换。检测器性能参数包括灵敏度、线性范围、稳定性等，影响检测结果的准确性和可靠性。

色谱工作站实现色谱数据的采集、处理、存储和打印等功能，提供定性和定量分析手段。数据采集卡将检测器输出的模拟信号转换为数字信号，便于计算机处理。数据处理软件具备峰识别、基线校正、标准曲线绘制等功能，提高数据处理效率和准确性。数据处理系统

03高效液相色谱分析方法

吸附色谱法利用吸附剂对样品中各组分吸附能力的差异进行分离。硅胶、氧化铝、活性炭等。适用于分离极性物质，如有机酸、氨基酸、糖类等。吸附剂活性、粒度、pH值等因素会影响分离效果。原理吸附剂种类应用范围注意事项

原理固定相种类流动相选择应用范围分配色谱用样品中各组分在固定相和流动相之间分配系数的差异进行分离。硅胶、键合硅胶、聚合物等。根据样品性质选择极性或非极性溶剂，可加入缓冲盐等调节pH值。适用于分离非极性至中等极性的物质，如烃类、酯类、酮类等。

原理键合相种类特点应用范围键合相色谱法利用化学键合在固定相表面的官能团与样品中各组分之间的相互作用进行分离。固定相稳定，重现性好，适用于反相色谱和正相色谱。C18、C8、氨基、氰基等。广泛应用于生物医药、环境监测、食品检测等领域。

利用凝胶的孔径大小与样品分子尺寸的匹配关系进行分离。原理葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等。凝胶种类分离效果好，但流速较慢，适用于分子量差异较大的样品分离。特点主要用于生物大分子如蛋白质、核酸等的分离和纯化。应用范围凝胶色谱法

04高效液相色谱操作技巧

03样品浓缩通过蒸发、旋转蒸发等方式将提取液浓缩至适当体积，便于后续进样分析。01样品提取选择合适的溶剂，通过浸泡、超声或搅拌等方式提取目标化合物。02样品净化利用吸附、萃取、层析等方法去除干扰物质，提高目标化合物的纯度和回收率。样品前处理技巧

色谱柱选择根据目标化合物的性质和分离要求选择合适的色谱柱类型和规格。色谱柱安装正确安装色谱柱，避免柱头损坏和漏液现象。色谱柱保养定期清洗色谱柱，避免柱内残留物对分析结果的影响；注意色谱柱的保存条件，避免受潮和高温。色谱柱使用与保养技巧

根据目标化合物的性质和分离要求选择合适的流动相组成，包括有机溶剂、缓冲盐等。流动相组成调整流动相的pH值，以改善峰形和分离效果。流动相pH值通过改变流动相组成或比例实现梯度洗脱，提高分离效果和分析速度。流动相梯度洗脱流动相选择与优化技巧

根据目标化合