《后生元（乳酸菌类）灭活菌数检验》.pdf

ICSXXXXXXX

CCSXXX

中国营养保健食品协会团体标准

T/CNHFAXXX—XXXX

后生元（乳酸菌类）灭活菌数检验

DeterminationofPostbioticInactivatedLacticAcidBacteriaCount

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国营养保健食品协会发布

T/CNHFAXXX—XXXX

后生元（乳酸菌类）灭活菌数检验

1范围

本标准规定了后生元（乳酸菌类）灭活菌数检验方法。

本标准第一法适用于后生元（乳酸菌类）纯菌粉原料灭活菌数的测定，第二法适用于后生元

（动物双歧杆菌乳亚种类）以及食品中添加了后生元（动物双歧杆菌乳亚种类）的灭活菌数测定。

2术语和定义

2.1灭活菌数

经热灭活处理的乳酸菌死细胞数。

2.2单拷贝基因

在细菌基因组中有且仅有一个拷贝数的基因。

非特异性方法细菌计数板法

3原理

利用细菌计数板在显微镜下直接计数，将经过适当稀释的灭活菌悬液置于细菌计数板计数室与

盖玻片之间，在显微镜下直接计数，根据观察到的细菌数目数换算成单位体积的菌悬液中细菌总数。

4试剂和材料

4.1试剂

4.1.10.85%生理盐水。

4.1.2灭菌蒸馏水。

4.2设备和材料

4.2.1显微镜（400倍）。

4.2.2电子天平：感量0.001g、0.0001g。

4.2.3细菌计数板及特定盖玻片（或其他适用计数板）。

4.2.4微量移液器及吸头。

4.2.51.5mL离心管。

5实验方法

5.1取适量无菌生理盐水缓慢滴加到洁净的细菌计数板上，将计数板置于显微镜的载物台上，在10

量物镜下观察，验证显微镜视野和细菌计数板网格的清晰度。

2

5.2用电子天平称取适量样品，用生理盐水溶解后再稀释至适宜浓度；

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5.3取浓度适宜的菌悬液缓慢滴加到洁净的细菌计数板上，盖上盖玻片，用滤纸将盖玻片边缘多余

样液吸干，将计数板置于显微镜的载物台上，静置2~3min待细菌沉降稳定；

5.4在10物镜下观察找到合适视野后，在40下物镜下观察计数5个中格的细菌数，每一个浓度平行

测定3次，计算平均值；

5.5用灭菌蒸馏水冲洗干净细菌计数板，待干燥后回收再用。

6计数原则与方法

图1细菌计数板计数原则示意图

6.1计数原则

6.1.1计下不计上，计左不计右（参考图1）；

6.1.2镜下偶见由两个或两个以上细菌组成的细菌团，应按单个菌计算；

6.1.3若细菌团在10%以上，需重新制备菌悬液。

6.2计数方法

以小格规格为0.05mm×0.05mm、深度为0.02mm的细菌计数板为例：小格面积=0.05

mm×0.05mm，每个中格由16个小格组成，盖玻片与载玻片之间液体高度为0.02mm：中格体积=

-43-7

0.05mm×0.05mm×16×0.02mm=8×10mm，即8×10mL。

计数公式：细菌数(cells/mL)=（中格细菌数×稀释倍数）/（8×10-7）

其他规格细菌计数板计算方法参考使用说明书。

7结果与报告

3次平行计数结果偏差应≤20%，计算平均值。

根据计数结果出具报告，报告单位以个/g(mL)表示。

8注意事项

8.1每一步稀释和制片前都需要将样品液充分混合均匀；

8.2制片时不得产生气泡，否则需要重新制片。