DR检测方法及应用.ppt

HIV耐药性毒株检测方法与应用;HIV颗粒;HIV的生命周期及药物作用靶位;抗HIV药物研发和应用取得长足进展

共6类34种药物

6种固定剂量药物合剂

2种进入/融合抑制剂

1种整合酶抑制剂

5种非核苷类逆转录酶抑制剂

11种核苷（酸）类逆转录酶抑制剂

9种蛋白酶抑制剂;HIV的耐药性

由于HIV的基因发生突变，导致病毒对药物的敏感性下降

是抗病毒治疗失败的主要原因

;耐药性产生的原因;高复制速率;体内的HIV是彼此不同的一群病毒,全基因组中只有很少的核苷酸是保守的，是复杂的病毒群体（准种Quasispecies）;耐药性产生：药物选择压力—外因

;HIV-1耐药突变;耐药是怎样发生的？;药物压力;耐药是怎样发展的？;获得耐药病毒的两种途径

-直接获得:

被耐药病毒感染

-药物选择:

病毒复制过程中可产生随机突变，由于药物压力不足，导致耐药性突变累积;ART;原发感染后耐药毒株能持续吗？;有些耐药毒株可以持续！;HIV-1耐药病毒的传播;复制适应性影响耐药毒株的传播;很多停止抗病毒治疗的病人，由于没有了药物压力，野生毒株取代耐药毒株获得生长优势，这往往伴随着CD4细胞数的下降

而抗病毒治疗失败产生耐药的很多病人，尽管病毒未受到有效抑制，但CD4细胞数仍高于治疗前的水平

可能耐药毒株的毒力和致病性比野生型病毒低，即使产生了耐药，维持耐药毒株占优势对病人可能也有好处;耐药毒株的流行率;我国部分地区抗病毒治疗失败病人的耐药谱;病毒-宿主-药物因素对HIV-1耐药毒株产生的影响

;促使耐药性病毒株出现的因素;服药依从性与耐药性病毒株;依从性与耐药的关系;药物配伍不当—药代显著不同药物配伍;与HIV-1耐药病毒相关的临床因素;耐药性突变的表示方法

野毒株的氨基酸＋氨基酸的位置＋突变后的氨基酸

K103N

一级突变（PrimaryMutation）：自身就可导致病毒对药物的敏感性降低

二级突变（SecondaryMutation）：与一级突变结合导致病毒对药物的敏感性降低或提高了一级突变毒株的复制适应性;主要耐药性突变举例;LNR;核苷类逆转录酶抑制剂（NRTIs）;SA;非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTIs）;K;膜蛋白gp41基因区突变与膜融合

抑制剂的抗性相关;HIV耐药性毒株的检测方法;HIV耐药性检测方法

基因型耐药性检测：检测HIV基因组中与耐药性相关的基因突变

表型耐药性检测：检测病毒在药物存在的情况下复制和生长的能力，是药敏试验;基因型耐药检测;基因型耐药性检测;HIV-1基因型检测方法;HIV基因型耐药性检测

（序列测定法inHouse）;耐药检测的实验室工作步骤;标本

新鲜EDTA抗凝血浆，或-80℃保存，避免反复冻融

;直接测序法的检测流程;病毒RNA提取（Qiagen公司试剂盒）

;逆转录RNAcDNA;逆转录RNAcDNA;巢式PCR扩增病毒蛋白酶和逆转录酶基因;巢式PCR扩增病毒蛋白酶和逆转录酶基因;扩增产物鉴定：琼脂糖凝胶电泳;扩增产物纯化

QIAquickGelextraction试剂盒

核酸序列测定

双脱氧链末端终止法

;:

Protease:

CCTCAAATCACTCTTTGGCAACGACCCCTCGTCACAGTAAAGATAGGGGGGCAATTAAAGGAAGCTCTATTAGATACAGGAGCAGATGATACAGTATTAGAAGAAATGAATTTGCCAGGAAAATGGAAACCAAAAATGATAGGGGGAATTGGAGGTTTTATCAAAGTAAGACAGTATGATCAGGTATCCATAGAAATCTGTGGACATAAGGCTGTAGGTACAGTATTAATAGGACCTACACCAGTCAACATAATTGGGAGAAATCTGTTGACTCAGATTGGTTGCACTTT

RT:

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