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乙醛脱氢酶多态性检测标准操作规程

一、检验目的

为保证本试验室检测乙醛脱氢酶基因型时DNA提取、PCR扩增及扩增产物杂交、显色、芯

片扫描试验操作的标准化，确保检测结果的准确性、重复性，制定本规程。

二、适用范围

适用于血液样本基因组DNA的提取、PCR扩增、杂交显色及报告。

三、方法原理

承受基因芯片技术，测序原理是杂交测序方法，即通过与一组序列的核酸探针杂交进展核

酸序列测定的方法，在一块基片外表固定了序列的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧

光标记的核酸序列TATGCAATCTAG与,基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确

定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列，据此可重组出靶核酸的序列.乙

醛脱氢酶2〔ALDH2〕在硝酸甘油的代谢过程中发挥着重要的作用，是硝酸甘油的有效代谢物一氧

化氮形成的关键，除此之外，还与酒精在人体内的分解代谢有关。ALDH2〔Glu504Lys〕基因突变

使乙醛脱氢酶活性也降低10倍以上，使酒精在体内从乙醇→乙醛→乙酸→水、二氧化碳的代谢过

程受阻，大量乙醛滞留在体内，给身体造成损害。除了损伤肝脏导致脂肪肝、肝硬化，甚至肝癌

外，还与食道癌、口咽癌和胃癌、冠心病、心肌梗死等风险相关。通过对ALDH2基因

的检测，将为硝酸甘油的用药、饮酒指导及相关高风险疾病的推测供给有效的参考依据。

四、性能指标

1.最低检出限：20ng。

2.准确度：以3种ALDH2〔Glu504Lys〕基因型的DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相

应型别；以10份企业标化的阴性质控品进展平行两次检测，结果全都且均为阴性；以浓度为

8ng/ul的基因组DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别。

2.周密度：以3种ALDH2〔Glu504Lys〕基因型的DNA样品分别对同一批试剂盒平行检测

20次，每天4次，分为5天，检测结果全都。

五、标本收集

1.标本类型：静脉血的全血标本作为检测标本(抗凝剂为EDTA，抗凝剂的质量应符合化

试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推举为准)。

2.标本保存室温保存不超过7天，2～8℃不超过1个月，-20℃不超过7周，

反复冻融不超过5次，全血的运输必需遵守国家相关规定。

3.标本拒收与1、2所述不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的缘由，并

提出解决方案或建议，并做好相关记录。

试剂的分装：扩增液融溶后，将其分装到0.2ml离心管中，22μ/l管。

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试剂的贮存：扩增液、阳性比照液、阴性比照液2～8℃贮存不超过1周，-20℃

可贮存至效期；反响液A在-20℃贮存。各组分在-20℃贮存期间，冻融次数不超过5

次。

扩增产物短时间内可于2-8℃保存。

六、试剂盒及仪器组成

台式高速离心机：离心速度能够到达12,000rpm〔9,500×g〕

恒温金属浴或水浴箱〔温度范围至少应包括56℃〕

涡旋振荡器

移液器：规格为1ml、200μl及100μl

紫外分光光度计：检测波长范围至少应涵盖260nm及280nm

血液基因组DNA提取试剂盒〔这里以BaiO®DNA提取纯化试剂盒为例〕

PCR仪：有热盖，使用0.2ml离心管

台式离心机〔可以对0.2ml离心管瞬时离心〕

琼脂糖凝胶电泳仪

移液器：规格为100μl，20μl，2.5μl

®

BaiOALDH2基因检测试剂盒〔DNA微阵列芯片法〕

移液器：规格为1ml，200μl，10μl

BaiO®ALDH2基因检测试剂盒〔DNA微阵列芯片法〕

BaiO®BR-526-24全自动杂交仪

BaiO®BE-2.0生物芯片识读仪

BaiO®基因芯片图像分析软件

®

BaiOALDH2基因型分析软件

七、标本处理及扩