形态学实验 实验一 显微镜的使用及细胞形态结构观察.pptx

形态学实验;实验一显微镜的使用及细胞形态结构观察;实验一细胞形态结构观察和普通光学显微镜的使用

一.实验目的

了解和掌握普通光学显微镜的的基本原理和操作规程。

二.实验原理

细胞是生物体的基本结构单位。构成生物机体的细胞是多种多样的。要对细胞进行研究，首先要从其形态结构入手。所以，要借助显微镜的成像及放大原理，在显微镜下，才能观察到细胞的基本形态结构。

;放大约20倍;RobertHooke首次观察并描述了植物细胞;Cell;A.V.Leeuwenhoek列文虎克1665年

世界上第一个微生物世界的发现者（发现了红血球和酵母菌），

1680被吸收为英国皇家学会的会员;基础知识;;在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：

物镜镜口率(N.A.)工作距离(mm)

10×0.255.40

40×0.650.39

100×1.300.11

显微镜的总放大倍数：目镜(K1)和物镜(K2)放大倍数的乘积，公式为:M=K1xK2

;显微镜的焦点深度：

显微镜调焦到看清楚标本某一点时，不仅是这一点，而且它的上下两侧也能看清楚，能看清楚的这两侧的厚度叫做焦点深度。要看到标本的全厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。;;基本原理;自发性荧光和继发性荧光;;基本原理;4.暗视野显微镜

通过特殊的暗视野聚光器，使照明光线改变途径，不直接进入物镜，而是倾斜地照射到样品上，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，由样品表面的绕射光线入射到物镜内，产生样品的衍射图象，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。因此可以在黑暗的背景中观察细胞的结构与形态，能见到小至0.02-0.004um的微粒子的存在和运动，但不能辨清物体的细微结构。

;5.相差显微镜;6.偏光显微镜

偏光显微镜（polarizingmicroscope）用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。

7.微分干涉差显微镜

DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比，其标本可略厚一??，折射率差别更大，故影像的立体感更强。;;9.透射电子显微镜;;10.扫描电子显微镜;11.显微操作技术;;1目镜

2目镜筒

3视度调节圈

4双目镜筒

5物镜转换器

6物镜

7夹片架

8载物台

9聚光镜

10孔径光栏

11聚光镜调节轮

12集光镜;;瞳距调节;屈光度调节;粗调松紧调节旋钮;聚光镜中心调节;孔径光栏调节;孔径光栏开度与图象;孔径光栏的运用;操作步骤如下:

(1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水平是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果可变光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的中心孔对准聚光镜下方的透镜中心。

(2)载物台上放置观察标本，把聚光器上升到它上端透镜平面稍低于载物台平面的高度，并将它的可变光栏开到最大，用低倍物镜，进行调焦到能看见标本，可调反射镜使视野得到最亮和最均匀的照明，或把光栏关小，最亮的照明区正处在视野的中央。

(3)转到高倍镜，并调焦到看清标本，然后去掉标本，拔出目镜，眼睛直接向镜筒观察，并把可变光栏关小，看其亮点是否在视野中心，如果不是，就要转动聚光器的调节螺旋，把亮点调到视野中央，再慢慢开启可变光栏，使视野看到光栏边缘和聚光镜的边缘相接为止。;3.观察操作：

低、高倍镜的使用:先把低倍的物镜用粗调焦螺旋下降至离盖玻片0.5cm处，然后一边观察视野一边上升物镜，直至看到图像，再将标本移到视野中心，用细调焦螺旋把物镜调至最清晰处，

若要用高倍镜观察时，把所要进一步放大观察的部位移至视野中央，直接顺时针转换成高倍物镜，然后用细调焦螺旋调焦，至看清物像。

;4.显微镜使用注意事项;思考题;正常及病理细胞观察比较;正常肝脏：可见门静脉、肝细胞索和汇管区。;(2)人肝细胞苏木精-伊红(H·E·)染色玻片标本的观察

先在干燥系物镜下观察肝小叶的概况，辨认肝细胞，然后用油镜仔细观察肝细胞的显微结构。注意肝细胞的形状，细胞核和核仁的形状和数量，细胞核和细胞质的染色区别等。;(3)肝癌细胞玻片标本观察