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Chapter5
Super-resolutionMicroscopy
5.1.IntroductionTypicalresolutionofopticalmicroscopeis~200nmThemicrostructureofcellsisusuallybetween50-500nmResearchonthecellorganellesneedtoextendtheresolvingabilityofopticalmicroscope.
TypicalDimensionsofCellOrganellesComponentsofatypicalanimalcell:NucleolusNucleusRibosome(littledots)VesicleRoughendoplasmicreticulumGolgiapparatusCytoskeletonSmooth
endoplasmic
reticulumMitochondrionVacuoleCytosolLysosomeCentrosomeCellmembrane
TheDiffractionLimit:
Abbe’sLaw?=2?/NA2
Abbe’sdiffractionlimits??
6≈200nm
MoleculeSizeComparedwithPSF
HowtoBreaktheDiffractionLimit?Developmentofsuper-resolutiontechnology
2014NobelPrizeinChemistryDevelopmentofSuper-resolvedFluorescentMicroscopyEricBetzigStefanW.HellWilliamE.Moerner
Contributionof
EricBetzig:Near-fieldScanningOptical
Microscopy(NSOM)Near-fieldmicroscopyusing
visiblelight(1993)Observesinglemoleculeusing
NSOM(1994)PALMConceptionoflocalizationmicroscopy(1995)Photoactivationlocalizationmicroscopy(2006)Besselbeamplaneilluminationmicroscopy(recently)
Contributionof
StefanW.Hell:Stimulatedemissiondepletion(STED)Proofofprinciple(1994,1995)STEDmicroscopy(2000)ReversibleSaturableOptical
FluorescentMicroscopy(RESOLFT)GSDRESOLFTwithphoto-switchableproteinsordyes
Contributionof
WilliamE.Moerner:Firstobservationofsinglemolecules(1989)4K,undersolidstateOpenthegatetosinglemolecule
spectroscopyBlinkingandphoto-activationofGFP(1997)Leadtothedevelopmentoflight-activatable
proteinDouble-helixmethodsfor3Dlocalization
Timeline‘Diffractionlimit’ofmicroscopyAbbe,1873;Rayleigh,1873.ElectronmicroscopyDeBroglie,1924;ErnstRuska,1931.SinglemoleculespectroscopyW.E.Moerner,1989.NearfieldscanningopticalmicroscopyEric,1992.PrincipleofSTEDandGSDSWHell,1994;SWHell,1995Blinkingandphoto-activationofGFPW.E.Moerner,1997.STEDMicrosc
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