羊传染性脓疱病诊断技术规范.docx

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CCS

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FORMTEXT西藏自治区地方标准

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FORMTEXT羊传染性脓疱病诊断技术规范

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FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT西藏自治区市场监督管理局??发布

STYLEREF标准文件_文件编号DBXX/TXXXX—XXXX

STYLEREF标准文件_文件编号DBXX/TXXXX—XXXX

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目次

TOC\o1-1\h\t标准文件_一级条标题,2,标准文件_附录一级条标题,2,前言 III

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

3.1羊传染性脓疱病 1

3.2PCR 1

3.3ddH2O 1

3.4PCRMasterMix 1

3.5DNAMarker 1

3.6荧光定量PCR探针法 1

3.7Ct值 2

4生物安全措施 2

5临床诊断 2

5.1流行病学 2

5.2临床症状 2

5.3结果判断 3

6病毒分离培养 3

6.1病料采集和处理 3

6.1.1痂皮 3

6.1.2水泡液 3

6.2主要仪器设备 3

6.3试剂耗材 3

6.4细胞 3

6.5方法 3

6.6判断 3

7分子生物学诊断 4

7.1样品DNA提取 4

7.2PCR检测 4

7.3荧光定量PCR检测（探针法） 4

8综合判定 5

附录A（资料性）相关症状图片 6

A.1口唇处出现大小不等的疣状增生 6

A.2蹄部出现桑葚样增生 6

A.3外阴部出现大小不等的疣状增生 7

A.4乳房部出现脓疱、痂垢 7

A.5其他部位病变（小肠） 8

附录B（资料性）聚合酶链式反应(PCR)产物电泳图 9

附录C（资料性）实时荧光定量PCR结果图 10

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所提出。

本文件由西藏农业农村标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所、云南农业大学。

本文件主要起草人：四朗玉珍、富国文、格桑卓嘎、班旦、樊月圆、拉巴次旦、吴金措姆。

羊传染性脓疱病诊断技术规范

范围

本文件提出了羊传染性脓疱病的临床诊断、病毒分离培养、分子生物学诊断技术要求。

本文件适用于羊传染性脓疱病的诊断。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489-2008实验室生物安全通用要求

GB/T27401-2008实验室质量控制规范动物检疫

NY/T3235-2018羊传染性脓疱诊断技术

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

羊传染性脓疱病

羊传染性脓疱病亦称羊口疮、羊传染性脓疱皮炎、羊传染性脓疱口炎，是由羊传染性脓疱病毒导致的山羊、绵羊接触性、嗜上皮性传染病。

PCR

聚合酶链式反应，英文全称PolymeraseChainReaction，缩写为PCR，由引物选择性体外扩增DNA或RNA片段的检测方法。

ddH2O

双蒸水，是重蒸水的一种，是将经过一次蒸馏后的水再次蒸馏所得到的水。

PCRMasterMix

PCR预混液。

DNAMarker

特定分子量大小的DNA片段混合物，用于估算样品DNA分子量的大小。

荧光定量PCR探针法

除了引物外另外设置一个探针，在探针的两端分别带上发光基团和淬灭基团，此时，两个基团平衡不发光；当DNA通过引物合成时，探针被折断，释放出发光基团和淬灭基团，两个距离较远，发光基团产生荧光，被机器收集到信号，从而检测基因的量。

Ct