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生物学常用实验方法

汇报人：XXX

2024-01-26

CATALOGUE

目录

显微镜技术

细胞培养技术

分子生物学实验方法

蛋白质研究技术

生物化学分析技术

遗传学实验方法

01

显微镜技术

利用可见光和光学透镜成像，观察细胞和组织结构。

原理

一般可达到0.2微米左右。

分辨率

广泛应用于生物学、医学等领域，如观察细胞形态、组织结构、微生物等。

应用

光学显微镜

电子显微镜

原理

利用电子束成像，观察细胞和组织的超微结构。

分辨率

可达到纳米级别，比光学显微镜更高。

应用

用于生物学、材料科学等领域，如观察细胞器、病毒、蛋白质等超微结构。

利用激光束和共聚焦技术成像，观察细胞和组织的三维结构。

原理

分辨率

应用

比传统光学显微镜更高，可达到亚微米级别。

用于生物学、神经科学等领域，如观察活细胞动态过程、神经元网络等。

03

02

01

激光共聚焦显微镜

02

细胞培养技术

原代细胞培养

将组织剪碎，通过酶或机械方法解离成单个细胞。

将解离后的细胞接种到培养皿或培养瓶中，加入培养基。

在适宜的温度、湿度和CO2浓度下，进行细胞培养。

当细胞密度达到一定程度时，进行传代培养，以维持细胞的生长和增殖。

组织解离

细胞接种

细胞培养

细胞传代

从冻存管中取出细胞，迅速解冻并接种到培养基中。

细胞复苏

当细胞密度达到一定程度时，进行传代培养，以维持细胞的生长和增殖。

细胞传代

选择对数生长期的细胞，加入冻存液并放入冻存管中，进行程序降温后保存于液氮中。

细胞冻存

支架材料选择

细胞接种

培养条件

应用领域

三维细胞培养

01

02

03

04

选择生物相容性好、可降解的支架材料，如胶原、明胶等。

将细胞接种到支架材料上，形成三维结构。

提供适宜的营养物质、生长因子和物理环境，促进细胞在三维结构中的生长和增殖。

三维细胞培养在再生医学、组织工程和药物筛选等领域具有广泛应用前景。

03

分子生物学实验方法

利用酚和氯仿的有机溶剂特性，将DNA从细胞裂解液中分离出来，并通过乙醇沉淀进行纯化。

酚/氯仿抽提法

采用商业化试剂盒，通过特定的缓冲液和吸附柱，实现DNA的快速提取和纯化。

试剂盒法

利用磁珠表面的特异性基团与DNA结合，通过磁场作用实现DNA的分离和纯化。

磁珠法

DNA提取与纯化

试剂盒法

采用商业化试剂盒，通过特定的缓冲液和吸附柱，实现RNA的快速提取和纯化。

TRIzol法

利用TRIzol试剂同时裂解细胞和灭活RNase，通过酚/氯仿抽提和乙醇沉淀，实现RNA的提取和纯化。

磁珠法

利用磁珠表面的特异性基团与RNA结合，通过磁场作用实现RNA的分离和纯化。

RNA提取与纯化

1

2

3

利用特异性引物和DNA聚合酶，在体外扩增特定DNA片段的技术。

常规PCR

在PCR反应体系中加入荧光基团，实时监测PCR产物量的变化，实现DNA片段的定量检测。

实时荧光定量PCR

将RNA逆转录成cDNA，再进行PCR扩增，用于检测基因表达水平。

逆转录PCR（RT-PCR）

PCR技术

将目的基因通过PCR扩增或酶切连接等方式插入到载体中，构建成重组质粒或病毒载体，再导入到宿主细胞中进行扩增。

基因克隆

将重组质粒或病毒载体导入到表达宿主细胞中，通过特定的诱导条件或组成型表达，实现目的基因的表达和产物积累。表达产物可以是蛋白质、多肽、抗体等生物活性物质。

基因表达

基因克隆与表达

04

蛋白质研究技术

03

蛋白质纯化

利用层析、电泳、超滤等方法分离纯化目标蛋白质，去除杂质和其他蛋白质。

01

细胞破碎

通过物理或化学方法破碎细胞，释放细胞内的蛋白质。

02

蛋白质溶解

使用适当的缓冲液和洗涤剂溶解蛋白质，保持蛋白质的天然状态。

蛋白质提取与纯化

SDS

十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳，用于分离不同分子量的蛋白质。

蛋白质转移

将凝胶中的蛋白质转移至固相支持物（如PVDF膜）上。

抗体检测

使用特异性抗体与目标蛋白质结合，通过显色或发光反应显示目标蛋白质的存在。

蛋白质印迹法

蛋白质鉴定

通过质谱分析、Edman降解等方法鉴定蛋白质的序列和结构。

蛋白质相互作用研究

利用酵母双杂交、免疫共沉淀等技术研究蛋白质之间的相互作用。

蛋白质分离

利用多维液相色谱、毛细管电泳等技术分离复杂样品中的蛋白质。

蛋白质组学技术

05

生物化学分析技术

比色法

通过酶促反应产生的有色物质与标准品比较，从而测定酶活性。

放射性同位素法

利用放射性同位素标记底物，通过测定放射性强度来反映酶活性。

荧光法

利用荧光物质与酶底物或产物结合，通过荧光强度的变化来测定酶活性。

酶活性测定

通过电场作用使生物大分子在凝胶中移动，根据移动距离和速度判断生物大分子的性质和相互作用。

凝胶电泳

利用生物大分子间的特异性亲和力，将目标分子从混合物中分离出来