动物细胞工程.pptx

细胞工程概况

细胞工程概况

什么是细胞工程？细胞工程概况应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论与方法，按照人们的需要和设计，在细胞水平上的遗传操作，重组细胞结构和内含物，以改变生物的结构和功能，即通过细胞融合、核质移植、染色体或基因移植以及组织和细胞培养等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。

细胞工程的发展史细胞工程概况1665年，胡克利用显微镜第一次观察到了细胞1997年，“多莉”羊的诞生1839年，施旺提出“细胞学说”1940，Earle首创单个细胞克隆培养，建立小鼠结缔组织L细胞系1978年胚胎工程技术成功培育出世界首例试管婴儿

细胞工程的发展史细胞工程概况动物细胞工程植物细胞工程微生物细胞工程细胞工程的分类粮食生产畜牧生产临床医学与药物科学研究细胞工程的应用

动物细胞工程主要研究内容细胞工程概况动物细胞与组织培养细胞融合细胞核移植胚胎工程干细胞与组织工程转基因动物

认识细胞细胞工程概况分类：原核细胞、真核细胞大小形态：体形极微，形态多样特点：动物细胞无细胞壁

认识细胞细胞工程概况细胞膜磷脂双分子层、蛋白质及糖链构成细胞质线粒体、内质网、高尔基体、核糖体、溶酶体、中心体等细胞核核膜、染色质、核液和核仁

细胞---周期细胞工程概况细胞的繁殖是通过细胞的分裂来实现的，连续分裂的细胞从一次分裂完成时开始到下一次分裂完成时为止。分裂真核细胞有丝分裂减数分裂无丝分裂

细胞—其他活动细胞工程概况分化死亡细胞坏死细胞凋亡

课堂小结细胞工程概况细胞工程概况定义发展史分类应用动物细胞工程主要研究内容细胞分类形态结构基本活动

动物组织、细胞培养

细胞培养及其基本原理

基本原理细胞培养及其基本原理动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中让这些细胞生长和增殖。细胞的增殖分化原理原代培养和传代培养过程

细胞培养条件细胞培养及其基本原理培养条件无菌无毒营养物质血清血浆温度pH气体环境

细胞培养分类：细胞培养及其基本原理原代细胞培养传代细胞培养根据细胞种类贴壁细胞培养半悬浮细胞培养悬浮细胞培养根据培养方式

原代培养细胞培养及其基本原理取出动物组织块剪碎胰蛋白酶或EDTA等消化加入培养基培养传代培养原代培养的细胞为正常的动物细胞，一般培养10代后不再增殖，死亡。

传代培养细胞培养及其基本原理当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长，这一过程就叫传代。

细胞株与细胞系细胞培养及其基本原理细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养细胞株细胞系随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖多数组织细胞固定在表面生长和分裂

细胞复苏、冻存与运输

细胞复苏细胞复苏、冻存与运输防止污染（无菌操作）解冻快速

细胞冻存细胞复苏、冻存与运输对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗、消化1000rpm，5min密度为5×106/ml～1×107/ml；每管1～1.5ml；标明细胞的名称，冻存时间及操作者将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中过夜。冻存液：10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清

细胞的运输01充液法运输细胞复苏、冻存与运输选用生长性状良好的细胞，当细胞贴壁长至1/2瓶底或接近连接成片时，去掉培养液，加入新鲜培养液至培养瓶颈部（保留少量空气），拧紧瓶盖。然后乙醇消毒瓶盖并用胶带将瓶口密封，瓶周围用棉花包裹，作防震防压处理，运送过程要注意保温。02冰冻法运输1.使用制式液氮罐运输：将细胞冻存管放入制式的运送液氮罐中进行运输，在液氮罐搬运过程中，要防止液氮外漏。2.使用装有干冰的泡沫塑料盒运输。要迅速将细胞冻存管从液氮中取出转入干冰中，否则细胞将会以10～20℃/min的速度升温，而且绝不能让细胞温度高于-50℃。

动物细胞大规模培养技术

培养技术动物细胞大规模培养技术指在人工条件下（设定ph、温度、溶氧等），在细胞生物反应器（bioreactor）中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。贴壁培养、悬浮培养和固定化培养类型生长激素、干扰素、单克隆抗体、疫苗及白细胞介素、药物等应用中应用

动物细胞融合

动物细胞融合

动物细胞融合也称细胞杂交，是指在一定的条件下将两个或多个动物细胞融合为一个细胞的过程。动物细胞融合

动物细胞融合动物细胞融合杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。同核体：基因型相同的细胞融合成的杂交细胞。异核体：来自不同基因型的杂交细胞。自发融合：同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并。诱发融合：异种间的