13-菌（毒）种的鉴定.ppt

鉴定项目1.毒力鉴定2.抗原性鉴定3.稳定性鉴定1.毒力鉴定常用易感实验动物、禽胚或细胞测定菌（毒）种的半数致死量（LD50)、半数感染量(ID50)、禽胚半数致死量(ELD50)、禽胚半数感染量(EID50)、组织细胞半数感染量(TCID50)等。具体鉴定方法将培养物连续递进稀释，将不同稀释度的培养物定量接种一定数量的动物（鸡胚或细胞），统计被接种对象在规定时间内的发病或死亡数（细胞病变数），按Reed-Muench法计算结果。数字越小说明致病力越强。LD50测定实例将某病毒培养物进行10倍递进稀释后，取几个连续的稀释度各接种小鼠5只，每只接种量0.1ml，在规定日期内死亡、生存及其累积数见下表：稀释度结果累积数死亡率%生存死亡生存死亡总数10-7050111110010-8141678610-9324263310-10509090Reed-Muench法计算公式比距（L）=（高于50%的死亡率-50%）/（高于50%的死亡率-低于50%的死亡率）lgLD50=死亡率高于50%的稀释度的对数—L×稀释倍数的对数。将数值代入公式L=（86-50）/（86-33）=0.68lgLD50=lg10-8－0.68×1=-8.68LD50=10-8.68，表示该病毒稀释至10-8.68时，每只小鼠接种0.1ml，能使50%的小鼠死亡。2.抗原性鉴定抗原性包括免疫原性和反应原性。免疫原性测定：通常是将菌（毒）株按各自的方法制成疫苗，免疫动物，同时设立阴性对照和阳性对照，经1～3周，所有动物均用致死量的强毒攻击，以保护率表示。在阴性对照、阳性对照结果正确的情况下，抗致死量强毒越多，保护率越高者，免疫原性越好。反应原性测定：一般采用血清学方法，以抗体滴度或效价表示。3.稳定性鉴定一般采用培养基、动物、禽胚或细胞对菌（毒）株进行传代培养，观察其生物学特性，测定其毒力和抗原性，以证明其遗传性状的稳定。