薄层色谱及柱色谱.ppt

有关化合物的物理性质：

注意事项：1.一根点样管只能点一种样品，否则有交叉污染。2,软板点样需很轻，否则固定相会粘到点样管下。3,样品点直径应不超过2mm，距离薄层板底部约1cm，样之间间距约1~1.5cm，展开时薄层板底部浸入展开剂的高度约0.5cm。注意样品点决不能浸到开剂中。4.展开剂离薄层板上缘约1cm时应停止走板，取出晾干。不可使展开剂走到板的尽头。板取出后要及时标记展开剂前沿，否则展开剂挥发后难以确定。吸附剂的选择：常用的吸附剂：氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭吸附剂要求： 不能与被分离的物质和展开剂发生化学作用； 吸附剂的粒度大小要均匀。粒度小，表面积大，吸附能力强，分离效果好，但流速慢粒度大，表面积小，吸附能力弱，分离效果差，但流速快。酸性（分离酸性物质，如有机酸类化合物） 中性（分离中性物质，如醛、酮、醌和酯类化合物） 碱性（分离碱性物质，如碳氢化合物、生物碱、胺等）本实验吸附剂：中性氧化铝（150目）氧化铝对各种化合物的吸附性大小：酸碱醇胺硫酸酯醛酮芳香族化合物卤代物醚烯饱和烃LOGOLOGO薄层色谱及柱色谱刘雪丽刘菲李喜梅钟家吉一、实验目的1、掌握色谱法的基本原理及其应用。2、掌握薄层色谱及柱色谱的操作技能。二、色谱法基本原理1.色谱法又称为层析法，是分离，纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。2.色谱法的基本原理是利用混合物各组分在两相间（流动相和固定相）的吸附或分配（溶解性能）的差异。即当混合物随流动相流经固定相时，由于固定相对各组分的吸附或溶解性能的不同，经过两相间反复多次的吸附或分配，使吸附较弱或溶解度较小的组分在固定相中移动较快，从而使各组分得到分离。3.色谱法的应用主要包括以下几个方面：（1）分离混合物（2）精致提纯化合物（3）鉴定化合物（4）跟踪反应进程三、色谱法的分类（1）薄层色谱：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上，形成薄层来进行物质分离及分析的方法。按其操作不同，可分为薄层色谱、柱色谱、纸色谱、气相色谱和高效液相色谱。（2）柱色谱：将固定相装在色谱柱中，使样品沿着色谱柱移动，通过各组分随流动相流动而得到分离的方法。（3）纸色谱：用滤纸等作为液体的载体，将样品点在纸上随后展开而达到分离鉴定的方法。（4）气相色谱：是以气体为流动相的色谱法。展开剂选用9:1的无水苯－乙酸乙脂偶氮苯苏丹Ⅲ四、薄层色谱1.薄层板的制备：（1）固定相的选择：吸附色谱：氧化铝、硅胶（H——不含黏合剂）分配色谱的支持剂：硅藻土、纤维素（F——含荧光物质）（G——含煅石膏2CaSO4·H2O黏合剂)薄层板的制备点样展开显色，计算、分析四、薄层色谱（2）制板：干法和湿法取3g硅胶G与6-7mL0.5%-1%的羧甲基纤维素钠的水溶液在烧杯中调成糊状物平铺或浸渍室温晾干后，放入烘箱内加热活化通常用六中染料确定活性四、薄层色谱2.点样（2）通常将样品溶于低沸点溶剂（丙酮，甲醇、乙醚等），根据使用的固定相配成0.5%-5%的溶液，用内径小于1mm管口平整的毛细管，在起始线上小心点样，斑点直径一般不超过2-3mm。（1）点样前，先在薄层板上据底端1cm处，用尺子、铅笔轻画一横线作为起始线。（3）同一块板可点几个样品点，但是间距应为1-1.5cm。点样要轻，不可刺破薄层！（注：因溶液太稀或样点太小，可重复点样。但应在前次点样的溶剂挥发后，方可重点，以防样点被溶解掉。样点过大，造成尾扩散等现象，影响分离效果）（4）点样结束，必须待样品点干燥后，方可进行展开。四、薄层色谱3.展开（2）展开操作：a.先在密闭的展开槽内倒入少量配好的展开剂，高度不能超过1cm。待其蒸气饱和，以达到平衡。（约5min）b.将点样后的薄层板放入展槽中，先不要接触展开剂，让薄层板吸附蒸气以达饱和。（约3min）c.将点样的一端放入展开剂中，垫高薄层板，始终使薄层板浸入展开剂为0.5cm，展开剂高度绝对不能浸过起始线！（展开剂若高于样品点，会使本就少量的样品溶于展开剂，难以随展开剂的展开而分离。达不到分