拉米夫啶耐药及试验室检测.pptVIP

YMDD的定量检测YMDD的定量检测YMDD的定量检测YMDD的定量检测与其它方法的比较

Comparisonofresultsobtainedbysequencing,pyrosequencingandreal-timePCRTypes Sequencing pyrosequencing real-timePCRrtM204 25(36%) 24(35%) 23(33%)rtM204I 26(38%) 24(35%) 21(30%)rtM204V 18(26%) 19(27%) 20(29%)rtM204I+rtM204V 0 2(3%) 5(8%)?YMDD变异定性判断的临界值定性判断：ΔCt3.5，此时病毒群体中突变株比例大于10%与测序法比较，15例标本结果完全符合YMDD变异定性判断的临界值什么时候开始检测YMDD变异

拉米夫定治疗过程中YMDD变异情况治疗时间HBVDNA大于104copies/ml例数YMDD变异例数*6个月 6 1（17%）6~12个月 26 14（54%）12~24个月 38 26（68%）24~36个月 38 38（100%）*各组之间两两比较均有显著差异（P0.05）。YMDD变异株的动态变化YMDD变异株的动态变化YMDD检测试剂—应用方法对接受拉米夫定治疗的慢性乙肝患者进行耐药监测治疗前检测一次（约有10-20%的人在治疗前就有YMDD变异）治疗开始后第七个月开始，每三个月检测一次拉米夫定耐药、替比夫定耐药（YIDD）恩替卡韦治疗YMDD变异患者存在耐药高风险慢性乙肝的基因分型乙肝病毒分八个基因型：根据基因组序列的差异可以分为A～H八种亚型，我国以B型（41%）和C型（53%）为主不同基因型病毒感染的病程和后果不同：C型对肝的损伤比B型严重，基因型C比基因型B更容易发展成为肝硬化不同的基因型对药物的应答也不一样：基因型B比基因型C对干扰素治疗的应答率高HBV基因分型PCR检测试剂运用多重、多色实时PCR技术，分别对乙肝病毒（HBV）各种基因型序列进行分析根据国内HBV基因型的特点，设计能检测HBVA~D四种基因型特异性引物及探针研制开发具有自主知识产权的乙肝病毒（HBV）基因分型多重、多色实时PCR检测试剂盒乙型肝炎病毒感染的现状全球约有3.5亿人感染乙型肝炎病毒，中国有1.2亿人感染，其中每年约有1-2%会出现肝硬化或肝癌而死亡HBV病毒颗粒感染肝细胞及DNA复制过程慢性乙肝的诊断HBsAg持续阳性6个月以上HBV-DNA高于105拷贝/毫升ALT持续升高或反复升高慢性乙肝的分类HBeAg阳性乙肝：HBsAg、HBeAg阳性；HBV-DNA高于105拷贝/毫升；ALT持续升高或反复升高HBeAg阴性乙肝：HBsAg、anti-HBe阳性；HBV-DNA高于104拷贝/毫升；ALT持续升高或反复升高诊断慢性乙肝的指标生化指标：ALT免疫学指标：HBsAg（携带指标）、HBeAg（活动指标）病毒学指标：HBV-DNAHBeAg阴性乙肝缺乏病毒活动的免疫学指标，前S1可以弥补这一缺憾，提供HBeAg阴性乙肝患者病毒活动的免疫学指标HBV-DNA检测的基本要求虽然国内HBV-DNA检测都用实时荧光PCR法，但不同厂家的产品定量标准的赋值有差异，从而导致定量结果的差异，而准确的定量结果直接影响到对病人的诊断以及治疗方案的选择HBVDNA定量试剂的溯源和标准化将是一种基本趋势慢性乙肝治疗的长期目标防止发展成为肝硬化或肝细胞癌在临床上，往往以比较现实的短期目标来代替长期目标慢性乙肝治疗的短期目标病毒抑制：表现为HBeAg血清转换和HBV-DNA阴转肝损伤程度降低：表现为转氨酶恢复正常完全清除病毒：表现为HBsAg消失，HBsAb出现，血清和肝细胞中检测不到HBV-DNA从目前水平来看，不可能完全清除病毒治疗慢性乙肝的药物免疫调节剂：干扰素、PEG干扰素、胸腺肽核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦、替比夫定、恩替卡韦、泰诺福韦等拉米夫定治疗与转氨酶浓度拉米夫定治疗一年后的HBeAg阴转率和HBV-DNA阴转率：ALT浓度低于2倍正常值高限：5%ALT浓度介于2-5倍正常值高限：26%ALT浓度高于5倍正常值高限：64%HBV-DNA定量检测的临床应用慢性乙肝诊断治疗监测和疗效评价跟踪随访预后判断HBV-DNA定量—

慢性乙肝的诊断HBsAg阳性六个月以上ALT持续升高或反