(精)实时荧光定量PCR检测原发性肝癌中PRL-2基因的表达【医学毕业论文设计】.DOC.docVIP

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2024-05-25 发布于江苏
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(精)实时荧光定量PCR检测原发性肝癌中PRL-2基因的表达【医学毕业论文设计】.DOC.doc

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(精)实时荧光定量PCR检测原发性肝癌中PRL-2基因的表达【医学毕业论文设计】.DOC

医学论文-实时荧光定量PCR检测原发性肝癌中PRL-2基因的表达作者：

程超，郭爱林，巫国勇，谢春玲，吴伟康【摘要】【目的】建立TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝细胞再生磷酸酯酶2(PRL-2)mRNA表达水平，并应用该法检测原发性肝细胞癌中PRL-2基因的表达。

【方法】构建含PRL-2基因开放阅读框架的T载体，制作标准曲线。

提取手术切除12例人肝癌、门静脉癌栓（PVTT）和癌旁组织总RNA并逆转录为cDNA。

应用实时荧光定量PCR法观察人肝细胞癌组织和门静脉癌栓及癌旁组织中PRL-2的表达水平。

【结果】线性检测范围达5个数量级,最低检测下限为1102拷贝,最高检测上限为1106拷贝。

PRL-2在所有的门脉癌栓及10例肝癌组织表达，仅在4例癌旁组织中表达。

门脉癌栓PRL-2mRNA表达水平显著高于肝癌及癌旁组织（P0.01），肝癌组织表达显著高于癌旁组织（P0.01）。

【结论】实时荧光定量PCR可以准确定量测定PRL-2基因的表达；PRL-2基因在门脉癌栓的更高表达提示其在肝细胞癌的发生、转移中可能起重要作用。

【关键词】肝细胞癌；聚合酶链反应;基因表达；PRL-2基因Abstract：

【Objective】ToquantitativelydetectthemRNAexpressionlevelofPRL-2inprimaryhepatocellularcarcinomawithRT-PCRmethod.【Methods】TvectorincludingopenreadingframeofPRL-2genewasconstructedtomakestandardcurve.ThetotalRNAisolatedfromhumanHCC,portalveintumorthrombosis(PVTT)andadjacentlivertissuewasreverselytranscribedintocDNA.TheRT-PCRmethodwasusedtoanalyzetheexpressionlevelofPRL-2gene.【Results】TheRT-PCRmethodwasperformedsuccessfullytopreciselydetectRNAlevelrangingfrom1102copiesto1106copies.PRL-2wasexpressedbyalltheportalveintumorthrombosis(PVTT)and10casesHCC,butonlyby4casesparatumortissue.TheexpressionlevelofPRL-2genewashigherinPVTTthanthatinparatumorlivertissuesandinHCC(P0.01),anditwashigherinHCCthanthatinparatumorlivertissues.【Conclusion】TheRT-PCRistheprecisemethodtoquantitativelydetectPRL-2geneRNAlevel.ThehigherexpressionofPRL-2geneinPVTTsuggestingthatitmayplayanimportantroleinthedevelopmentandmetastasisoftheHCC.Keywords:hepatocellularcarcinoma;polymerasechainreaction;geneexpression;PRL-2Gene[JSUNYat-senUniv(MedSci),2007,28（６）:702-705]