组培苗生产技术—外植体的选择、处理与接种（植物组织培养课件）.pptx

外植体的离体培养技术;一、外植物体的选择与处理;选择合适的大小：根据不同的植物而异，太大容易污染，太小，多形成愈伤组织甚至难于成活。一般在0.5-1.0cm之间。如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小。

选择最适的时期：组织培养选择材料时，一般按植物生长的最适时期选取材料，要注意植物的生长季节和植物的生长发育阶段。这样不仅成活率高，而且生长速度快，增殖率高；花药培养应在花粉发育到单核期时取材，这时比较容易形成愈伤组织。

;;单子叶植物不易诱导器官发生。

b.木本植物较难诱导。

c.存在基因型差异（如番茄29%~63%）

d.开始生长季节取材容易诱导。;外植体种类及基因型;外植体的离体培养技术;任务外植体的选择与处理

;四、外植体的接种;（一）外植体的接种（无菌操作）;接种注意事项;3．在打开培养瓶、三角瓶或试管时，最大的污染危险是管口边沿沾染的微生物落入管内，解决这个问题，可在打开前用火焰烧瓶口。如果培养液接触了瓶口，则瓶口要烧到足够的热度，以杀死存在的细菌。为避免灰尘污染瓶口，可用纸包扎瓶口和塞子，以遮盖瓶子颈部和试管口，相对地减少污染机会。;4．工具用后及时消毒，避免交叉污染。

5．工作人员的呼吸也是污染的主要途径。通常在平静呼吸时细菌是很少的，但是谈话或咳嗽时细菌便增多，因此操作过程应禁止不必要的谈话并戴上口罩。;6．由于空气中有灰尘，因此在操作时，仍要注意避免灰尘的落入。尽量把盖子盖好，当打开瓶子或试管时，应拿成斜角，以免灰尘落入瓶中。刀、剪、镊等用具，一般在使用前浸泡在95%酒精中，用时在火焰上消毒，待冷却后使用。每次使用前均需进行用具消毒。;外植体接种全过程;酒精擦拭;;外植体的离体培养技术;

外植体的消毒是组培成功与否的第一关键步骤。

外植体的预处理：对外植体进行修整,去掉不要的部分,在流水下冲洗干净.

外植体的表面灭菌：

原则：充分灭菌，但不伤外植体；不同的外植体，灭菌的要求也不一样。

;外植体消毒灭菌的要求

包括两个方面：

把外植体上带的一切微生物，包括真菌、细菌及其他微生物都杀死

不能损伤组织材料，保持外植体的生活力，使外植体在良好的培养条件下很快恢复生机，正常生长和繁殖.

;消毒剂的要求

要求：具有良好的消毒作用，既不会杀死植物的组织细胞，又易被无菌水冲洗掉，不影响消毒后外植体的生长和分化.

;灭菌剂;外植体消毒顺序:;;外植体的离体培养技术;二、外植物体的种类与选择;（二）实例分析

1、花卉（非洲菊）

常用茎尖、嫩叶、花托进行非洲菊的组织培养，也有利用种子进行组织培养的。

茎尖培养操作麻烦，但对于脱毒苗的生产是最有效的。

花托培养可直接成苗，

既可保持种性，又易行、

耗时短，是首选的外植体。

;首先要选择花大、花色艳丽、市场流行的品种，然后再选择无病虫害、植株生长健壮、花色纯正的优良品种单株进行取材。

一旦选出优株后，应进行挂牌标记，并一直在其上采取花蕾。作为外植体的花蕾要选取直径在1㎝左右，而且未露心的小花蕾，太大或是太小的花蕾均不能获得满意的效果。

;2、水果（草莓）

（1）选择结果性优良的草莓母株上新抽出的匍匐茎作外植体，以每年6～7月份最为适宜。

（2）在无病虫害的田块，连续晴天3～4d时选取生长健壮、新萌发且未着地的匍匐茎段3cm长作外植体。

;3、蔬菜（龙牙百合）

龙牙百合特征:鳞茎，无皮，广卵形，外部鳞片长,将整个鳞茎包裹，直径5~15厘米，白色，茎高90厘米左右，直立茎上叶多而散生，披针形，叶色从浓绿，光滑。花单生茎顶。花朵呈喇叭状长筒形，白色，有清香。

;龙牙百合的许多器官、组织都可作为外植体，如鳞片、花梗、叶片、茎尖、腋芽、花瓣、花托、花丝、花药、胚、子房、根尖等，其中采用鳞片作外植体的较多。

;以鳞片为例，在选取外植体时，要选择具备龙牙百合品种特征、无病虫害危害的种球。外部鳞片易污染要将其剥离，中部鳞片肉质厚，生长势强，易诱导小鳞茎，是最佳的外植体。内部鳞片幼嫩，诱导率低，不易产生小鳞茎，故不宜采用。就季节性而言，以秋、冬季的鳞片分化成小鳞茎的能力最强，