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高考生物知识点·专题18·微生物的利用

微生物的分离和培养

（1）实验原理

①分离的依据：微生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上，样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。

②纯化的依据：将单个菌落接种到斜面培养基上，经培养后，即可得到一个微生物的纯种。

（2）方法步骤

①微生物的分离

1）稀释：用1mL无菌吸管吸取1mL大肠杆菌培养液，加入到盛有9mL无菌水的大试管中，充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1mL加入另一支盛有9mL无菌水的试管中，混合均匀，依次类推制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6系列稀释度的大肠杆菌稀释液。

2）划线或涂布

a.平板划线分离法：在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取大肠杆菌培养液一环在平板上划线，常用的划线方法有平行划线和连续划线两种。划线完毕后，盖上培养皿盖，做好标记。

b.涂布分离法：取3个平板，底面分别用记号笔写上10-4、10-5、10-6三种稀释度，然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各0.1mL，放入已标记好的平板上，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5-10min，使菌液吸附进培养基。

3）培养：将划线或涂布接种的平板倒置于培养箱或温室中37℃培养16-24h，即可长出单个菌落。

②接斜面

分别从培养后长出的单个菌落上挑取少许细胞，接种到斜面培养基上，置培养箱或温室37℃培养24h，斜面上菌种长好后，4℃保存备用。

（3）示例

①制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

②纯化大肠杆菌的方法

③菌种的保存方法

培养基概述及其分类

概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。

营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。

种类：按物理性质分——液体培养基、固体培养基和半固体培养基；按成分来源分——天然培养基和合成培养基；按功能用途分——选择培养基和鉴别培养基。

培养基对微生物的选择作用

培养基是进行微生物培养的物质基础。

选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。

a.选择依据：不同种类微生物的生长繁殖对营养的要求不同。

b.选择途径：人为控制培养基的pH、碳源、氮源、渗透压等条件。

c.选择结果：使选择的培养基利于某类或某种微生物的生长，而不利于其他微生物的生存，可以达到分离、培养不同微生物的目的。

灭菌技术

灭菌：强烈的理化因素杀死物体内外的全部微生物。（含芽孢、孢子）

灭菌与消毒的区别：

消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。

灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。

测定某种微生物的数量

测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。

尿素分解菌的分离与计数

实验原理：

（2）实验流程：

①土壤取样→富含有机质的土壤表层土

②样品的稀释→通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30~300之间、适于计数的平板

③接种→用稀释涂布平板法接种

④培养→细菌：30~37℃培养1～2天；放线菌：25~28℃培养5～7天；霉菌：25~28℃培养3～4天

⑤观察→根据菌落的特征区分微生物

⑥计数→统计菌落的数目

⑦计算→根据公式“每克样品中的菌落数=（C÷V）×M[C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数]”进行计算

（3）分解尿素的细菌的鉴别：

纤维素分解菌的分离

实验原理

反应依据：土壤中存在大量纤维素分解菌，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶，分解和利用纤维素和半纤维素。

检测依据：因此在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能很好地生长，并产生黄色或棕绿色色素，其他微生物则不能生长。

方法步骤

方法一：

制备培养基：依据小辞典，配制依姆歇涅茨基液体培养基。

分装：按每试管5mL分装，然后加入7cm×1cm滤纸条，滤纸条紧贴内壁，且一半浸入培养基中，121℃灭菌20min。

制备土壤稀释液：制备10-1、10-2、10-3、10-4、10-5的土壤稀释液。

接种培养：分别吸取各稀释度的土壤稀释液1mL接种到滤纸条上，每个稀释度重复4次，置培养箱中28℃培养14d。

观察：检查各试管中滤纸条上出现的菌落和滤纸颜色变化情况。

方法二：

制备培养基：制备依姆歇涅茨基培养基平板，在平板上铺一张直径略小于平板的滤纸，用