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;目录;1.用具和仪器
酒精棉球、小块纱布、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、超净工作台等。;接种专用酒精灯;2.药品和试剂;3.脱毒试管苗;开口消毒;2.准备工作
①接种室的清洁和消毒。
②超净工作台的开机和消毒。
③剪刀、镊子、已灭菌培养皿、酒精棉球、酒精灯、待用培养基等的准备。;2.无菌操作
①操作前,操作人员洗手及手消毒。
②使用的镊子、解剖刀等用95%酒精浸泡,之后放在酒精灯上灼烧灭菌,再放在灭菌后的培养皿中冷却后使用。
③培养瓶外壁的消毒。;2.无菌操作
④将马铃薯试管苗剪为单节茎段后接种到培养基中,在植入材料的前后,培养瓶的瓶口须在酒精灯火焰上烧烤灭菌。;2.无菌操作
⑤封口、标记、将培养瓶置于培养架上,在温度20~25℃,光照强度2000~3000lx,光照时间12~14小时/天的条件下培养。;;引言;常规组培苗生长不好的原因;主要内容;(一)提出
植物无糖培养快繁技术是由日本设施园艺与环境控制专家古在丰树教授在20世纪80年代末提出的,是一种全新的植物组织培养技术。
;(二)含义
植物无糖培养快繁技术,又称为光自养微繁殖技术,是指在植物组织培养中以CO2代替糖作为植物体的碳源,通过控制影响组培苗生长发育的环境因子,促进植株光合作用,以更接近植物自然生长状态、成本相对较低的方式生产优质种苗的一种植物组织培养技术。;(三)与常规组培技术的不同点
改变了碳源的供给途径,即改变培养基成分,培养基中不再含有糖;组培苗培养容器改为箱式大容器培养;输入可控制量的CO2气体作为碳源。并通过控制培养环境因子,促进植株光合作用速率,使之由异养型转变为自养型。
因而可使植株长势良好,生物量较有糖培养的显著增加,污染率明显降低。;(三)与常规组培技术的不同点;(四)目标与要求
植物无糖培养快繁的目标是在短时间内获得大量的遗传基因相同、生理一致、生长发育正常、无病无毒的群体植株。
要求植株有高的光合能力或光独立生长能力(能利用空气中的CO2作主要的碳源)。;(一)缩短培养周期
通过人工控制,动态调整优化植物生长环境,为种苗繁殖生长提供???佳的CO2浓度、光照、湿度、温度等环境条件,促进了植株的生长发育,苗齐、苗壮,培养周期缩短40%以上。
(二)简化培养程序
无糖组培工艺的简单化,流程缩短,技术和设备的集成度提高,降低了操作技术难度和劳动作业强度,更易于在工厂化生产上推广应用。
;(三)提高种苗质量
无糖培养组培苗生长健壮,消除了小植株生理和形态方面的紊乱,植株的生根率、驯化期间的成活率大幅度提高。;(三)提高种苗质量;(四)降低生产成本
采取无糖培养技术,大幅度降低植物组培生产过程中的微生物污染和电的消耗。;以大豆、海棠、核桃、生姜、甘薯、香蕉等20多种植物为材料的植物无糖培养试验表明,无糖组培苗的移栽成活率可提高10%以上,培养周期缩短了25%以上,生产成本降低了35%以上。
;;目录;一、准备阶段
1.信息的准备--资料的收集、分析
查明需要组培植物的学名、品种名及商品名等,然后有目的地进行文献检索,查阅该植物组织培养方面相关的报道,着重阅读近3~5年的文献,进行综合分析。
2.实验条件的准备
3.实验技术的准备;二、无菌培养体系的建立
(一)工作流程;二、无菌培养体系建立
(二)关键问题
1.探索出适宜的外植体消毒方案
2.获得无菌培养物,诱导出中间繁殖体
3.建立无菌培养体系
(三)解决措施
1.试验筛选
2.树立无菌意识,严格无菌操作;三、试管苗的增殖
(一)工作流程;三、试管苗的增殖
(二)促进试管苗增殖的措施
1.改良培养基
根据基本培养基配方的特点、材料种类与快繁(植株再生增殖)类型,选择合适的基本培养基。
2.改善培养条件(具体措施)
温度、光照、相对湿度、pH、气体
;四、试管苗的壮苗、生根
(一)工作流程;四、试管苗的壮苗、生根
(二)促进试管苗壮苗、生根的措施
1.选择合适的基因型植株、合适的部位、合适的年龄、合适的生理状态。
2.改良培养基。
3.改善培养条件:适宜温度一般在16~25℃,过高过低均不利于生根。
一般发根不需要光。不同类型植物需要光照时间和光照强度不同。
pH一般5.0~6.0。;五、试管苗驯化移植
(一)炼苗适期
当小植株生出3~5条水平根、每条根长2~3cm时,为最适宜的出瓶炼苗阶段,随即进入试管苗的炼苗移栽阶段。;五、试管苗驯化移植
(二)炼苗驯化
将长有完整试管苗的培养瓶由培养室转到半遮荫的自然光下锻炼,并打开瓶盖注入少量自来水使幼苗逐渐降低温度,转向有菌,一般进行1~2周。;五、试管苗驯化移植
(三)移植
1.直接移栽法
直接将试管苗移栽到盆钵的方法。
2.常规移栽法
3.嫁接移栽法;
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