天然植物饲料原料中菊苣酸和咖啡酸的测定 高效液相色谱法.pdfVIP

天然植物饲料原料中菊苣酸和咖啡酸的测定

高效液相色谱法

1范围

本文件描述了天然植物饲料原料中菊苣酸和咖啡酸的高效液相色谱测定方法。

本文件适用于天然植物饲料原料中菊苣酸和咖啡酸的测定。

本文件天然植物干燥物、粉碎物单一型和复配型饲料原料中菊苣酸和咖啡酸的检出限为0.03g/kg，

定量限为0.1g/kg;含粗提物的天然植物饲料原料中菊苣酸和咖啡酸的检出限为0.06g/kg，定量限为

0.2g/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

GB/T19424天然植物饲料原料通用要求

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

天然植物饲料原料naturalplantasfeedmaterial

以植物学纯度不低于95%的单一天然植物干燥物、粉碎物或粗提物为原料，添加或不添加辅料制得

的单一型产品；或以2种或2种以上天然植物干燥物、粉碎物或粗提物为原料，添加或不添加辅料，经复

配加工而成的复配型产品;或由天然植物粉碎物和粗提物复配而成的混合型产品。

注：包括天然植物干燥物饲料原料（单一型和复配型）、天然植物粉碎物饲料原料（单一型和复配型）、天然植物

粗提物饲料原料（单一型和复配型）、混合型天然植物饲料原料。

4原理

试样中的菊苣酸和咖啡酸用乙醇溶液提取，高效液相色谱测定，外标法定量。

5试剂或材料

除非另有规定，所用试剂均为分析纯。

5.1水：GB/T6682,一级。

5.2甲醇：色谱纯。

5.3甲酸：色谱纯。

5.460%乙醇溶液：量取600mL乙醇（5.3）于1000mL容量瓶中，加水（5.1）定容，混匀。

5.50.3%甲酸溶液：量取3mL甲酸（5.3）于1000mL容量瓶中，加水（5.1）定容，混匀。

5.6标准储备溶液（10mg/mL）：准确称取菊苣酸标准品（CAS号：70831-56-0，纯度≥98%）、咖啡

酸标准品（CAS号：331-39-5，纯度≥98%）各100mg（精确至0.1mg），分别置于10mL棕色容量瓶

1

中，用乙醇溶解并定容，混匀。-18℃以下避光保存，有效期6个月。

5.7混合标准中间溶液（1mg/mL）：分别准确移取菊苣酸和咖啡酸标准储备溶液（5.6）各1mL于10

mL棕色容量瓶中，用60%乙醇溶液（5.4）定容，混匀。-18℃以下避光保存，有效期6个月。

5.8混合标准系列溶液：准确移取适量混合标准中间溶液（5.7），用60%乙醇溶液（5.4）配制成浓度

均为0.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL和100μg/mL混合标准系列溶液。临用现

配。

5.9微孔滤膜：0.45μm，有机系。

6仪器设备

6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。

6.2分析天平：感量为1mg和0.1mg。

6.3超声波清洗机。

6.4冷冻离心机：转速不低于4000r/min。

6.5涡旋混合器。

7样品

按GB/T20195制备样品，至少200g，粉碎使其全部通过0.425mm孔径的试验筛，充分混匀，装

入密闭容器中，避光保存，备用。

8试验步骤

8.1提取

平行做两份试验。准确称取试样0.5g~1.0g（精确至1mg），置于100mL离心管中，准确加入40

mL60%乙醇溶液（5.4），涡旋混匀5min，超声提取1h（温度控制在35℃以下）。冷却至室温，4000

r/min离心10min。将上清液转移至50mL容量瓶中，加入60%乙醇溶液（5.4）定容到50mL，混匀。

移取适量提取液，4000r/min离心