hIL-12腺病毒载体的构建及在人hBMSCs中的表达的开题报告.docxVIP

hIL-12腺病毒载体的构建及在人hBMSCs中的表达的开题报告

摘要

IL-12是一种重要的免疫调节因子，能够作用于T细胞和NK细胞，发挥调节和刺激免疫功能的作用。本研究旨在构建hIL-12腺病毒载体，并将其应用于人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）中，观察其在细胞中的表达情况，为进一步的免疫治疗提供实验支持。

首先，利用PCR技术克隆人IL-12A和IL-12B基因，将其与pCMV6-AC-GFP载体进行重组，获得hIL-12A/pCMV6-AC-GFP和hIL-12B/pCMV6-AC-GFP质粒。然后，将两个质粒进行双酶切并连接，获得重组hIL-12A/B/pCMV6-AC-GFP质粒。接着，将其与AdMax?易位载体进行重组，获得hIL-12A/B/AdMax?质粒。最后，将重组质粒转染到293A细胞中，通过限制性内切酶切和PCR检测确认构建成功。利用Westernblot和ELISA检测封装感染后hBMSCs中的hIL-12表达情况，结果显示在hBMSCs中成功表达了hIL-12，并且腺病毒载体能够高效介导hBMSCs中的基因转染。

本研究成功构建了hIL-12腺病毒载体，并成功表达在hBMSCs中。这为进一步研究hIL-12在免疫治疗中的应用提供了实验依据。

关键词：腺病毒；人IL-12；骨髓间充质干细胞；基因表达

Abstract

IL-12isanimportantimmunoregulatoryfactorthatcanregulateandstimulateimmunefunctionsbyactingonTcellsandNKcells.TheaimofthisstudywastoconstructahIL-12adenovirusvectorandtoapplyittohumanbonemarrowmesenchymalstemcells(hBMSCs)toobserveitsexpressionincells,providingexperimentalsupportforfurtherimmunotherapy.

Firstly,humanIL-12AandIL-12BgeneswereclonedbyPCR,andwererecombinantwithpCMV6-AC-GFPvectortoobtainhIL-12A/pCMV6-AC-GFPandhIL-12B/pCMV6-AC-GFPplasmids.Then,thetwoplasmidsweredouble-digestedandconnectedtoobtainrecombinanthIL-12A/B/pCMV6-AC-GFPplasmid.Subsequently,therecombinanthIL-12A/B/pCMV6-AC-GFPplasmidwasrecombinedwithAdMax?transfectionvectorstoobtainhIL-12A/B/AdMax?plasmid.Finally,therecombinantplasmidwastransfectedinto293Acells,andconfirmedtobesuccessfullyconstructedbyrestrictionenzymedigestionandPCRdetection.TheexpressionofhIL-12inhBMSCsafterpackagingandinfectionwasdetectedbyWesternblotandELISA,andtheresultsshowedthathIL-12wassuccessfullyexpressedinhBMSCs,andtheadenoviralvectorcouldefficientlymediategenetransfectioninhBMSCs.

Insummary,thisstudysuccessfullyconstructedahIL-12adenovirusvectorandexpresseditinhBMSCs,providingexperimentalevidenceforfurtherresearchontheapplicationofhIL-12inimmunotherapy.

Keywor