伤寒沙门菌高渗诱导基因osmY的克隆表达与抗OsmY多克隆抗体的制备的开题报告.docxVIP

伤寒沙门菌高渗诱导基因osmY的克隆表达与抗OsmY多克隆抗体的制备的开题报告

一、选题背景和意义

伤寒沙门菌是一种常见的肠道致病菌，能引起人和动物的感染。该菌在环境中存在条件较为宽松，但在宿主体内生存繁殖时，需要不断应对细胞外环境的变化。高渗环境是细胞外环境的一种常见变化，能引起菌体内部水分子的通过细胞膜传输，使得菌体细胞内出现水分减少的情况。在此情况下，菌体需要发生一系列反应来保持细胞内水分的平衡，其中最重要的反应为高渗应激反应。高渗应答途径属于细胞对各类生存压力的反应机制之一，其可帮助菌体应对多种环境压力并使其在不良环境下生存。该反应途径的关键是一组诱导基因，包括osmY作者要克隆伤寒沙门菌的osmY基因来研究其在高渗应答途径中的作用，并制备抗OsmY多克隆抗体，以期能更深入地了解该基因的生物学功能及其抗原性。

二、研究内容和方法

本研究拟从伤寒沙门菌中克隆osmY基因并进行表达，制备抗OsmY多克隆抗体。具体方法如下：

（1）克隆osmY基因

使用PCR技术从伤寒沙门菌中扩增含有osmY基因的DNA片段，并进行测序确认；使用限制性内切酶和连接酶将该DNA片段连接至表达载体中，并进行测序鉴定。

（2）转化大肠杆菌BL21（DE3）

使用化学法将表达质粒pET28a-osmY转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，并筛选出含有重组质粒的菌株。

（3）表达OsmY融合蛋白

诱导大肠杆菌BL21（DE3）菌株表达重组蛋白，收集细胞并进行裂解和超声提取，获取OsmY融合蛋白。

（4）制备抗OsmY多克隆抗体

将获得的OsmY融合蛋白免疫家兔，提取免疫血清，并纯化产生的抗OsmY多克隆抗体。

三、研究预期成果

预计本研究能成功克隆表达伤寒沙门菌的osmY基因，制备出抗OsmY多克隆抗体，并初步探究osmY基因在伤寒沙门菌高渗应答途径中的作用及其抗原性，为深入研究该基因的生物学功能和其在感染中的作用提供必要基础。