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CEBPα参与调节Per2基因对白血病K562细胞的表型影响及其机制研究的开题报告

开题报告

1.研究背景和意义

慢性髓细胞白血病（CML）是一种血液系统恶性肿瘤，由于染色体易位引起的BCR-ABL蛋白质产生失控而导致白血细胞增殖和骨髓造血功能紊乱，进而导致贫血、出血等临床表现。虽然目前CML已有标准化疗方案，但白血病干细胞（LSC）的存在使得难以彻底治愈CML，因此需要探索新的治疗方法。

近年来，发现将CML细胞长期培养，在一定的环境条件下，仍能保持正常分化状态，并表达周期基因Per2，提示其可能与白血病干细胞形成和药物敏感性相关。因此，研究Per2基因在CML细胞中的调控机制和作用，有望为CML的治疗提供新的方向。

2.研究目的和内容

本研究旨在探究CEBPα在CML细胞中调控Per2基因表达的作用及其机制，具体内容包括：

1）建立CML细胞株K562的CEBPα激活或敲除模型。

2）检测CEBPα的激活或敲除对K562细胞的表型影响及Per2表达的变化。

3）利用荧光素酶报告基因检测CEBPα对Per2启动子活性的调控作用。

4）检测CEBPα和Per2之间的相互作用及其对CML细胞的影响。

3.研究方法和技术路线

1）建立CEBPα激活或敲除的K562细胞株，采用CRISPR/Cas9技术，设计并合成适合激活或敲除CEBPα表达的CRISPR载体，经过筛选获得稳定的细胞株。

2）检测CEBPα的激活或敲除对细胞表型影响，包括细胞增殖、周期和细胞死亡等指标，使用Westernblot等方法分析Per2蛋白表达变化。

3）利用荧光素酶报告基因检测CEBPα对Per2启动子活性的调控作用，将Per2启动子转染进K562细胞中，加入CEBPα激活或敲除的载体，检测报告基因表达的变化。

4）检测CEBPα和Per2之间的相互作用及其对CML细胞的影响，使用共免疫沉淀和ChIP-PCR等方法检测两者相互作用的强度及其在CML细胞中的生物学作用。

4.研究预期成果和意义

本研究预期获得CEBPα在CML细胞中调控Per2表达的作用及其机制，为CML干细胞分化和药物敏感性提供新的治疗靶点和策略，有望为CML的治疗提供新的思路。