实验一 质粒DNA的提取及检测.pptx

ppt课件1实验一

质粒DNA的提取及检测

ppt课件2质粒（plasmid）是染色体外小型（1-200kb）的共价、闭合、环状的双链DNA分子（cccDNA），能自主复制并能稳定遗传的遗传因子。常常编码一些对宿主有利的酶的基因，这些基因的表型包括抗生素抗性、产生抗生素、限制酶、修饰酶等质粒的复制：严紧型复制（1~n个）松弛型复制（20个以上）

ppt课件3常用的质粒载体是通过DNA重组技术构建而成的。pUC18,pUC19

ppt课件4质粒提取的思路质粒的特性：共价、闭合、环状的小分子量DNA要去除的物质：蛋白基因组DNA脂类及小分子杂质RNA

ppt课件5第一部分质粒DNA的提取

ppt课件6一．目的了解提取质粒的原理。学习和掌握质粒提取的方法和技术。细菌的生长和质粒的扩增菌体的收集裂解及质粒DNA的分离质粒DNA的纯化

ppt课件7二．原理碱变性法提取主要是利用共价闭合环状质粒与线性染色质在拓扑学上的差异：在pH12.0-12.6碱性环境中，线性的大分子量细菌染色体DNA变性，而共价闭环质粒DNA仍为自然状态；将pH调至中性并有高浓度盐存在的条件下，染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构，大部分DNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍为可溶状态。通过离心可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质，质粒D