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单克隆抗体的作用机制及相关方法要点

治疗性单克隆抗体〔mAb〕作为抗感染剂和免疫调整药物，主要用于癌症治疗，是制药行业最活泼的争论和开发领域之一。抗肿瘤抗体药物包括未偶联完整的抗体或片段，抗体药物偶联物，抗体同位素和双特异性抗体等。这些抗体分子不是小分子化学药物，而是简单的生物学分子，其具有多个并且通常简单的机制，测量其生物学活性需要特地的技术，因此充分地了解mAb的作用机制进而在早期临床前阶段选择最正确的候选抗体药物是格外重要的。

众所周知，化合物分子的功能是由其构造打算，mAb也不例外。抗体由抗原结合域〔Fab〕和可结晶区域〔Fc〕组成。Fab主要特异性识别肿瘤相关抗原，进而调控下游的信号通路。Fc可以识别并结合表达Fc受体的免疫细胞以及血液中的补体进而介导抗体依靠的细胞毒作用〔ADCC〕,抗体依靠的细胞吞噬作用〔ADCP〕以及补体依靠的细胞毒作用〔CDC〕等效应功能，Fc还可以结合FcRn从而在体内不被轻易去除而延长了其在机体内的半衰期。抗体的作用机制比较简单，可以参考之前的文章《一图看尽67个抗体药物靶点和作用机制》。在这里依据抗体的构造，我们将其作用机制分为Fab相关的作用机制和Fc相关作用机制。

在这里，我们将介绍目前应用最为广泛的单克隆抗体，即免疫球蛋白〔IgG〕的作用机制。

一、Fab相关的作用机制1〕识别游离的靶点的单抗

游离存在于血液循环中的细胞因子、促血管生成因子、生物毒素等都可以作为单抗的作用的靶点。蛋白因子通过与受体的结合，传导信号进入细胞，调控细胞的功能。过量表达的蛋白因子传导过量的信号，打破细胞的正常功能。毒素和病毒等也必需通过与细胞外表的受

体结合进入细胞内部从而发挥作用。中和抗体的作用机制就是通过结合抗原进展中和，使抗原丧失结合受体的力量，进而丧失生物学功能。常见的针对游离靶点的抗体有血管内皮生长因子〔VEGF〕抗体，肿瘤坏死因子〔TNF〕抗体，炭疽毒素中和抗体等。

2〕识别细胞外表受体的单抗

每一种抗体都可以特异性结合特定的抗原靶点。靶点抗原表达在特定细胞外表，具有特定的功能，例如细胞激活、生长或迁移。依据抗体的Fab活性，可以分为结合、拮抗和激活〔图1〕。结合型抗体只是结合在靶蛋白外表但并不影响其功能。因此，靶蛋白受体的配体仍旧可以与其结合，从而传递信号。结合性抗体可以用于标记靶细胞，从而让其Fc产生效应功能或通过搭载毒素从而杀灭靶细胞。拮抗性抗体封阻受体上的与配体相互作用所需的表位，阻挡配体结合产生的信号传导。常见的那他珠单抗和达替珠单抗均为拮抗性抗体。激活型抗体模拟配体的功能，识别结合靶受体并传导信号至细胞内部。基于被激活的细胞内信号强弱，激活型抗体可能在治疗时使得靶细胞被激活并释放细胞因子，进而产生副作用。

图1识别细胞外表受体的单抗的作用机制(Fabdependent)二、Fc相关的作用机制

单克隆抗体通过其Fc部位结合各种Fc?Rs,进而发挥其效应功能，包括ADCC,ADCP和CDC〔图2〕.以最常见的IgG1为例，其Fc区域通过结合Fc?RIII〔CD16A〕激活NK细胞诱导ADCC；与巨噬细胞

上Fc?RIII〔CD16A〕，Fc?RII〔CD32A〕和Fc?RI〔CD64〕结合，引发ADCP；与补体的C1q结合激活补体引发CDC。Fc还能够以pH依靠的方式结合生的Fc受体〔FcRn〕，避开被核内体降解，从而延长单克隆抗体的半衰期。

图2单抗隆抗体〔IgG1〕作用机制(Fcdependent)1〕ADCC

ADCC作用是一种细胞介导的免疫防范机制，在靶细胞膜外表抗

原结合了特异性的抗体的状况下，激活免疫系统的效应细胞进而裂解靶细胞的作用。因其对已存在的抗体的依靠性，ADCC作用是适应性免疫反响的一局部，也是体液免疫反响的一局部，用于限制和消退感染。经典的ADCC作用由NK细胞介导，巨噬细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞也能介导ADCC作用。比方嗜酸性粒细胞能通过ADCC作用杀死某些特定的寄生虫。

体外检测ADCC效应有几种方法，一种是标记靶细胞的方法：比方用51Cr或具有膜通透性的甲基酯荧光染料，比方calcein-AMorDELFIA-BATDA，靶细胞标记后，参加抗体孵育，然后再参加

NK92/CD16A细胞或者从PBMC纯化的NK92，或者PBMC作为效应细胞，不同的效应细胞和靶细胞的比例(E:T)，不同的孵育时间(通常低于4小时，更长的孵育时间也是可以的，只是自发释放会相应变大)。孵育完毕后，参加enhancingsolution，用不同的仪器检测放射性同位