细胞凋亡和细胞坏死(共45张PPT).pptxVIP

细胞凋亡和细胞坏死;细胞凋亡（科普诗）;细胞凋亡（科普诗）;危难中的细胞啊，

你沉稳不乱，

DNA片片切割，

化云梯直通天堂；

细胞体分团相聚，

把生命的凝重浓集在小体上；

分别了朝夕相处的伙伴，

再见了快乐美好的时光；

这一切的一切又融入临近的胞体，

腾出的空间再写生命的篇章。

;细胞死亡形式;;细胞凋亡的生理和病理意义;细胞凋亡与疾病发生机制的新认识;细胞凋亡的过程;凋亡过程及分期

诱导期执行期消亡期;凋亡时细胞的主要变化;;

;胸腺细胞;胸腺细胞;细胞凋亡的生化改变;;2.内源性核酸内切酶激活及其作用;3.Caspase9激活，需要通过CARD（caspase-recruitmentdomain)、Apaf-1、细胞色素c、ATP等多个因子的参与;细胞凋亡的调控;1.细胞凋亡的诱导因素;检测方法

荧光测定免疫吸附法(flurometricimmunosorbentenzymeassay,FIENA),caspase-3可作用于连接荧光素的特异底物－乙酰化天冬氨酸-谷氨酸-颉氨酸-天冬氨酰胺(Ac-DEVD),产生发荧光的裂解产物AFC，且caspase-3活性与Ac-DEVD-AFC分解的量或自由荧光AFC产生荧光的强弱成正比，故可定量检测

内源性核酸内切酶激活及其作用

PARP89kD的检测

内切核酸酶(endonuclease,DNase)

p53,Myc,Fas等

检测：WesternBlotting

Caspase-3活性测定(FIENA法)

而坏死或凋亡后坏死细胞的DNA分解是随机的，产生的碎片分子量大小不一，在电泳时形成“涂片状”(smear)。

把生命的凝重浓集在小体上；

断裂）凋亡小体识别、吞噬（无

PARP89kD的检测

②偶联性：与增殖分化的信号系统交叉偶联

随着研究技术的提高和对凋亡的认识不断深入，检测凋亡的方法已从细胞、染色质到分子水平日趋完善和成熟。

双向调控基因：c-myc，bclx;(二)细胞凋亡信号的转导

-凋亡信号转导系统特点;㈡细胞凋亡信号的转导;㈢细胞凋亡相关基因;Bcl-2抗凋亡机制;细胞凋亡发生机制;（一）氧化损伤机制;（二）钙稳态失衡引起细

胞凋亡的可能机制;细胞凋亡的生物学意义;;细胞凋亡的检测;一．细胞凋亡的形态学分析;细胞凋亡的形态学检测方法;二.DNA降解分析;;(二)原位标记法

TUNEL(TdTmediateddUTPnickendlabeling)终末脱氧核糖核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记技术。

原理：在TdT的作用下，带有标记物的dUTP被连接在断裂DNA3’末端，然后通过相应的方法检测标记物，从而判断是否有凋亡发生。

应用范围：石蜡包埋的组织切片、冰冻组织切片、培养细胞、组织中分离的细胞 ;(三)ELISA法

原理：以抗组蛋白抗体包被微孔板壁，加入标本，凋亡细胞的核小体可与抗体结合，再加入抗-DNA片断-POD复合物，与核小体中的DNA片断结合，最后加入POD显色底物，以酶标仪测定光密度以进行定量分析。;三.凋亡酶学分析;Caspases的检测

1.Caspase-3活性测定(FIENA法)

荧光测定免疫吸附法(flurometricimmunosorbentenzymeassay,FIENA),caspase-3可作用于连接荧光素的特异底物－乙酰化天冬氨酸-谷氨酸-颉氨酸-天冬氨酰胺(Ac-DEVD),产生发荧光的裂解产物AFC，且caspase-3活性与Ac-DEVD-AFC分解的量或自由荧光AFC产生荧光的强弱成正比，故可定量检测

2.蛋白印迹法

Caspases作用底物的检测

PARP89kD的检测;病毒致病病毒表达抗凋亡蛋白。

（二）钙稳态失衡引起细

胞凋亡的可能机制

抑制凋亡：Bcl-2,Bcl-Xl,Bcl-w,Mcl-1,A1/Bfl-1等

抑制凋亡基因：bcl-2

ICAD(inhibtorofCAD)

促进凋亡基因：fas，P53

DNA的片段化“梯”状条带

激活baxor下调bcl-2

而坏死或凋亡后坏死细胞的DNA分解是随机的，产