5-离子交换色谱法.pptVIP

1903-1906年，俄国植物学家Tswett发表了叶绿素和其他植物色素分离过程的描述。但直到25年后才得到公认。一、离子交换色谱法的分类1）淋洗色谱：通常先将少量样品通过交换柱，达到吸附平衡，然后用亲和力比组分A、B、C都弱的离子作淋洗剂，得到相互分离开的淋洗曲线。主要用于分析分离。2）置换色谱：先将较大量的样品（通常接近柱的满负载）通过交换柱，然后用亲和力比组分A、B、C都强的离子作淋洗剂，将样品组分依次置换下来，得到部分重叠的淋洗曲线。可用于大量物质的制备分离。又称顶替or排代色谱。3）前沿色谱：将样品直接通过交换柱，最先流出的组分可以部分得到纯的组成（不需要淋洗剂）。实际应用不多。又称迎头色谱。淋洗色谱：Li+，Na+，K+的分离：（1）含有Li+，Na+，K+的混合溶液通过强酸型阳离子交换树脂柱，三种离子都被树脂吸附。（2）用0.1mol/L的HCl淋洗，三种离子都被洗脱。（3）根据树脂对这三种离子亲和力的不同，依次得到不同的金属离子（见淋洗曲线）。（4）将洗脱下来的Li+，Na+，K+分别用容器收集后进行测定。置换色谱：锂和钠的硫酸盐混合溶液通过一根氢型DOWE×50，300目树脂的交换柱，用1.0mol/L(NH4)2SO4淋洗得到的淋洗曲线。有时，在淋洗液中加入一定的络合剂，降低金属离子与树脂的亲和力，从而使得NH4+,Na+能对二、三价的金属离子起到置换作用。Li+＜H+＜Na+＜NH4+＜K+＜Rb+＜Cs+＜Ag+＜Tl+前沿色谱将含氯、溴、碘三个卤素离子的钠盐混合溶液通过一支Ac-交换柱的淋洗曲线。二、离子交换色谱的操作技术1）交换柱的准备：填充均匀2）淋洗加样时不能扰动柱床。要求有恒定的流速，否则出现不规则小峰。3）流出液的收集与分析手工检测/自动分析？绘制淋洗曲线（浓度与淋洗体积V）层析柱的基本装置如图。层析柱通常是玻璃的。长柱分辨力好（柱子径高比一般在1：5-10），但大量物质的处理则用粗的柱比较适宜。层析柱的填装是先关闭出口，用溶剂灌注至1/3体积，并使支持板下的“死体积”不存有气泡，再慢慢地向溶剂中加浆状物，要小心地沿着玻棒倾注以防止气泡存留在柱内。让悬浮液沉淀，并放出过多的溶剂，为了避免分层，最好一次装完，如需分几次填装，则在二次填装前应先在已经沉淀的表面用玻棒搅拌后再倾注，重复这个过程，直至装到需要的高度。用溶剂彻底洗涤层析柱后使液面降到比层析床表面略高一点。最后覆盖一张圆形滤纸或尼龙布，以免加样时扰乱床表面。加样上柱前，先将样品溶解在溶剂里或对洗脱液透析，样品溶液的浓度应该尽可能高些，以减少样品溶液体积，使区带狭窄。将样品仔细加到层析床的表面，打开旋塞至液面与床面齐，然后连接溶剂池，保持一定高度的液面。三、提高离子交换分离效果的途径1）树脂的选择与填充技术参照文献方法，结合被分离对象（阴离子？阳离子？）选择合适类型的柱子装柱通常采用重力下沉法。将树脂用蒸馏水调成浆状，在柱内加入3cm的蒸馏水，然后到入浆状树脂，让其在重力作用下下沉。（匀浆法）不能有裂缝。2）流速最佳流速根据树脂的性能、粒度大小、交换反应的快慢等由实验结果确定。流速应稳定、适中.太快，难以有效分离，或者出现紊流，是本来已经分开的组分重新混合；太慢，耗时，也可能由于扩散使分离效率降低。（通常可调范围有限。）3）淋洗液的性质与浓度（重要的影响因素！）浓度太高，组分很快被洗脱，未能得到分离；浓度太低分离时间延长，并出现拖尾现象。有时可采用梯度淋洗法，即用两种或两种以上浓度的同一种淋洗液按一定顺序淋洗，其效果见图。有时，还采用酸度、温度梯度淋洗。在分离稀土元素时，性质差别小，为了扩大差异，可加入柠檬酸作淋洗剂（络合淋洗，非简单的交换）。4）温度提高温度可以加快传质速度，加快反应速度（如络合交换），有利于改善分离效果。（但操作上有一定的难度。）5）交换柱的长度、内径结合分离效率、实际需求（样品量）、操作难易（填充均匀性、柱压）等考虑。四、离子交换色谱法的应用同离子交换分离法。（色谱方法与离子交换法相互结合，提高了分离效率，尤其是性质相似物质的分离或者多种组分的分离。）例：氨基酸的分离交联度为8%的强酸性聚苯乙烯型树脂，约50um，柱温50℃。以150×0.9cm的交换柱，0.2M柠檬酸钠，pH3.24-4.25为淋洗剂可以先分离出酸性氨基酸如谷氨酸