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人脐带间充质干细胞操作规范

一、人脐带间充质干细胞的分离和培养

1.准备4~5个培养皿，打开放在超净台中，将消毒过的平剪×1，弯剪×2，有齿镊子×4，放入超净台，紫外照射30min，通风10min;

2.在1#、3#和4#号培养皿倒入25ml生理盐水，在2#培养皿倒入25ml酒精;3.将盛放脐带的器皿用酒精消毒外表面后放入超净台，用弯嘴钳取出脐带放入1#培养皿，清洗残留血渍，用第2把弯嘴钳配合挤出脐带血管内的积血;4.将脐带转移至2#培养

皿，完全浸泡，计时1min;

5.将脐带转移至3#培养皿，用平剪剪成3cm左右的小段，清洗脐带内的积血(如果积血较多，可再次转入另一加盐水的培养皿);

6.用有齿镊子分离2根动脉和1根静脉，剥离华尔通氏胶，放入4#培养皿;7.将剥离的胶体转移至50ml离心管中，2000rpm离心5min;8.弃上清液，将胶体倒入干净的培养皿中，用小剪刀将其剪成糊状并转移至50ml离心管中;

9.以0.5ml/瓶的量将胶体组织块接种至T75培养瓶，每瓶加入4ml脐带有血清培养液(DMEM/F12+10%FBS+1%L-Glutamine+1%MEMNEAA+10ng/ml

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