2002诺贝尔-质谱可编辑.pptVIP

肽和蛋白质序列的质谱测定方法Edman降解（Edmandegradation）：从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。N末端氨基酸残基被苯异硫氰酸酯修饰，然后从多肽链上切下修饰的残基，再经层析鉴定，余下的多肽链（少了一个残基）被回收再进行下一轮降解循环。2.1以化学降解反应为基础的质谱测序方法肽和蛋白质序列的质谱测定方法2.1以化学降解反应为基础的质谱测序方法用异硫氰酸苯酯（PITC）与待分析多肽的N-端氨基在碱性条件下反应，生成苯氨基硫代甲酰（PTC）的衍生物，然后用酸处理，关环，肽链N-端被选择性地切断，得到N-端氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接着用有机溶剂将该衍生物萃取出来，酸作用下，该衍生物不稳定，会继续反应，形成一个稳定的苯基乙内酰硫脲（PTH）衍生物。余下肽链中的酰胺键不受影响。肽和蛋白质序列的质谱测定方法2.1以化学降解反应为基础的质谱测序方法1993年，Chair等在Edman测序法的基础上，在偶联试剂中加入少量与PITC(异硫氰酸苯酯)结构相似，但与肽氮端形成衍生物不被三氟乙酸水解的苯异氰酸酯(PIC)，通过多次Edman降解循环，产生逐一相差一个氨基酸残基的梯状肽分子系列，然后通过质谱表征的分子量差别了解全肽序列。在此基础上又发展出多种新的测序法，他们主要的着眼点在肽链氮端